傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的以侵害雛雞淋巴組織，特別是中樞免疫器官—法氏囊為主要特征的傳染病。該病不僅引起患病動物死亡，而且還導(dǎo)致機體免疫抑制，是引起我國及世界養(yǎng)禽業(yè)經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重的主要傳染病之一。近幾年，由于變異株和超強毒株（vvIBDV）的出現(xiàn)，使本病的發(fā)生和流行出現(xiàn)新的特點，對養(yǎng)雞業(yè)的危害更加嚴(yán)重，并給臨床診斷和治療帶來了一定困難。因此，研制快速、準(zhǔn)確的診斷方法對IBD的防治至關(guān)重要。本研究旨在制備抗IBDV的單克隆抗體，建立IBDV雙抗體夾心ELISA和膠體金免疫層析試紙條檢測方法，為IBD的快速檢測和診斷提供幫助。 1.分泌抗傳染性法氏囊病病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立 用純化的IBDV抗原免疫BALB/c小鼠，制備脾細(xì)胞，與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞系融合，獲得3株能穩(wěn)定分泌抗IBDV VP2蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1D11、2G8和2E5，抗體亞類分別為IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ，誘生腹水的抗體效價分別為107、106和107。間接免疫熒光試驗（IFA）表明，3株單克隆抗體均與感染IBDV的DF-1細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)；免疫印跡...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1IBDV基因組結(jié)構(gòu)示意圖

(5’-noncodingregion,5’-NCR)、編碼區(qū)和3’端非編碼區(qū)(3’-noncodingregion3’-NCR)(Kibengeetal，1997；Mundtetal，1995)。A節(jié)段長約3200~3300....

圖2膠體金免疫層析試紙條結(jié)構(gòu)示意圖

體硝酸纖維素膜的制備pH7.6的PBS分別將純化的2G8單抗和羊抗鼠IgG稀釋為以下/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL，噴涂于硝間距為0.5cm且互相平行的檢測線和對照線，置室溫自然干燥F-1細(xì)胞培養(yǎng)物作為抗原進(jìn)行層析....

圖3純化病毒的電鏡檢查結(jié)果(Bar=100nm)

純化病毒的電鏡檢查結(jié)果(Bar=10usobservationunderelectronmicros檢測方法，純化IBDV抗原的最融合率為90%(259/288)。經(jīng)間接BDV單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株清液與腹水抗體效價測定結(jié)果見表1單克隆抗體的亞類及效價測定

圖4單克隆抗體在DF-1細(xì)胞上的間接免疫熒光鑒定圖(100×)

29圖4單克隆抗體在DF-1細(xì)胞上的間接免疫熒光鑒定圖(100×)DVB87的DF-1細(xì)胞分別與1D11,2G8,2E5反應(yīng)；b,d,f:正常DF1D11,2G8,2E5反應(yīng)Fig.4Indirectinimmunofluorescenceassa....

本文編號：3945767