為構(gòu)建一種核酸免疫膠體金的制備方法,將抗體與寡核苷酸共價(jià)連接,并與含互補(bǔ)序列的寡核苷酸修飾的膠體金雜交。紫外掃描檢測(cè)顯示,使用4-(N-馬來(lái)酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽(SMCC)共價(jià)偶聯(lián)修飾的抗體-核酸,抗體分子修飾核酸的數(shù)量最多。通過(guò)蛋白定量、瓊脂糖凝膠電泳、鹽沉、pH調(diào)節(jié)等試驗(yàn),比較核酸免疫膠體金和傳統(tǒng)靜電吸附方式制備的免疫膠體金的抗體結(jié)合率、目標(biāo)捕獲率以及探針的穩(wěn)定性,并初步測(cè)試了新型探針在試紙條檢測(cè)上的應(yīng)用。結(jié)果表明:構(gòu)建的核酸免疫膠體金的抗體結(jié)合率比傳統(tǒng)免疫膠體金高20%,探針捕獲目標(biāo)的效率高40%(以藍(lán)耳病毒為例),穩(wěn)定性更好(0.5～1 mol·L^-1鹽濃度及pH 4～10),試紙條檢測(cè)有明顯特異性(以藍(lán)耳病毒為例)。這一研究成功構(gòu)建了一種具有更好抗體負(fù)載率、靶病毒結(jié)合率、穩(wěn)定性的核酸免疫膠體金,有望替代傳統(tǒng)的免疫膠體金,制備更穩(wěn)定更靈敏的試紙條,用于抗原、抗體及病毒的快速檢測(cè)。

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1材料與方法
    1.1試劑和儀器
    1.2抗體修飾
        1.2.1點(diǎn)擊化學(xué)方式
        1.2.2 SMCC偶聯(lián)方式
    1.3核酸免疫膠體金制備
    1.4表征與測(cè)試
2結(jié)果與分析
    2.1核酸免疫膠體金的抗體修飾表征
    2.2免疫膠體金的抗原結(jié)合活性
    2.3免疫膠體金的抗體及靶病毒結(jié)合能力
    2.4免疫膠體金的鹽和pH穩(wěn)定性
    2.5核酸免疫膠體金用于試紙條的初步測(cè)試
3討論
4結(jié)論



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