本研究旨在建立水牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)前后GV/MⅡ(Germinal vesicle,GV)/(MetaphaseⅡ,MⅡ)期對(duì)應(yīng)的卵丘細(xì)胞miRNA數(shù)據(jù)庫(kù),篩選兩個(gè)時(shí)期差異表達(dá)的miRNAs,為進(jìn)一步闡明miRNA通過(guò)調(diào)控卵丘細(xì)胞中基因表達(dá)進(jìn)而在卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中發(fā)揮的重要作用提供科學(xué)依據(jù)。分別收集水牛GV/MⅡ期的卵丘細(xì)胞,提取總RNA,利用Solexa測(cè)序技術(shù)獲取小RNA測(cè)序數(shù)據(jù),并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:本研究成功構(gòu)建了GV/MⅡ期卵丘細(xì)胞miRNA的表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)相對(duì)于GV期卵丘細(xì)胞,miRNA在MⅡ期卵丘細(xì)胞中表達(dá)差異顯著上調(diào)的有24個(gè),表達(dá)差異顯著下調(diào)的有45個(gè)。采用qRT-PCR技術(shù)對(duì)隨機(jī)篩選的8個(gè)miRNAs進(jìn)行驗(yàn)證,證實(shí)其表達(dá)水平和RNA-seq分析結(jié)果相一致。結(jié)合靶基因預(yù)測(cè)和KEGG富集分析,獲得了276條顯著富集的信號(hào)通路;同時(shí)對(duì)富集前20的信號(hào)通路進(jìn)行歸納總結(jié),推測(cè)差異表達(dá)的miRNAs主要是通過(guò)細(xì)胞增殖、凋亡,物質(zhì)代謝,細(xì)胞連接等途徑在卵丘細(xì)胞中發(fā)揮作用。

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【部分圖文】：

圖１ＧＶ（Ａ）和ＭⅡ（Ｂ）期的卵丘－卵母細(xì)胞復(fù)合體Ｆｉｇ．１Ｔｈｅｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅｃｏｍｐｌｅｘｓｏｆＧＶ（Ａ）ａｎｄＭⅡ（Ｂ）ｓｔａｇｅ

畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)４８卷１Ｂ）對(duì)應(yīng)的ＣＣｓ為ＭⅡ期ＣＣｓ。其中ＧＶ期ＣＣｓ共收集６次，來(lái)自７０１個(gè)ＧＶ期卵母細(xì)胞的ＣＣｓ，ＭⅡ期ＣＣｓ共收集６次，來(lái)自６２０個(gè)ＭⅡ期卵母細(xì)胞的ＣＣｓ，將收集的兩個(gè)時(shí)期的ＣＣｓ經(jīng)１２００ｒ·ｍｉｎ－１離心５ｍｉｎ，棄上清，再用ＰＢＳ重懸離心２次，棄上清，立....

圖２小ＲＮＡ長(zhǎng)度分布Ｆｉｇ．２ＬｅｎｇｔｈｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ

ＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣｂｔａ－ｍｉＲ－４９１－ＦＧＧＧＡＡＣＣＣＴＴＣＣＡＴＧＡＧｂｔａ－ｍｉＲ－１２９６－ＦＧＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＴＣｎｏｖｅｌ－２１４－ＦＣＴＣＧＣＣＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＣ統(tǒng)一反向引物ＵｎｉｆｉｅｄｒｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒＣＧＣＡＧＧＧＴＣＣＧＡＧ....

圖６差異表達(dá)ｍｉＲＮＡｓ靶基因ＫＥＧＧ富集散點(diǎn)圖Ｆｉｇ．６ＫＥＧＧｅｎｒｉｃｈｅｄｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔｆｏｒｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｏｆｍｉＲＮＡｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄ

），其次是蛋白結(jié)合功能上（６７．３５％），再次是催化活性方面（３３％）和離子結(jié)合功能上（２４．４９％）。２．６差異ｍｉＲＮＡｓ靶基因ＫＥＧＧ富集分析在生物體內(nèi)，不同基因相互協(xié)調(diào)行使其生物學(xué)功能，通過(guò)Ｐａｔｈｗａｙ顯著性富集能確定候選靶基因參與的最主要生化代謝途徑和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。Ｋ....

圖１ＧＶ（Ａ）和ＭⅡ（Ｂ）期的卵丘－卵母細(xì)胞復(fù)合體Ｆｉｇ．１Ｔｈｅｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅｃｏｍｐｌｅｘｓｏｆＧＶ（Ａ）ａｎｄＭⅡ（Ｂ）ｓｔａｇｅ

畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)４８卷１Ｂ）對(duì)應(yīng)的ＣＣｓ為ＭⅡ期ＣＣｓ。其中ＧＶ期ＣＣｓ共收集６次，來(lái)自７０１個(gè)ＧＶ期卵母細(xì)胞的ＣＣｓ，ＭⅡ期ＣＣｓ共收集６次，來(lái)自６２０個(gè)ＭⅡ期卵母細(xì)胞的ＣＣｓ，將收集的兩個(gè)時(shí)期的ＣＣｓ經(jīng)１２００ｒ·ｍｉｎ－１離心５ｍｉｎ，棄上清，再用ＰＢＳ重懸離心２次，棄上清，立....

本文編號(hào)：3939200