布魯氏菌病是由布魯氏菌感染引起的一種人畜共患傳染病,臨床表現(xiàn)多種多樣,動(dòng)物感染后導(dǎo)致妊娠母畜流產(chǎn),雄性動(dòng)物睪丸炎;人類感染可引起波浪熱、多汗、關(guān)節(jié)腫痛、肝脾腫大等癥狀。不僅對(duì)畜牧業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失,還嚴(yán)重威脅人類健康。布魯氏菌具有多種致病因子,采取多種逃避機(jī)體免疫的機(jī)制,使它們能夠在細(xì)胞內(nèi)存活下來(lái)并在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制。巨噬細(xì)胞作為先天免疫的效應(yīng)細(xì)胞,在抵御病原體入侵過(guò)程中起重要作用。然而布魯氏菌可以逃避巨噬細(xì)胞的殺傷作用,在巨噬細(xì)胞內(nèi)生存和繁殖,造成機(jī)體的慢性感染。研究表明,野生型布魯氏菌感染抑制巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-12,還能夠抑制巨噬細(xì)胞吞噬功能以及抗原提呈,從而抑制Th1細(xì)胞免疫,導(dǎo)致機(jī)體不能有效清除布魯氏菌。然而與野生型相比,豬布魯氏菌Omp25缺失突變株對(duì)巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-12的抑制作用減弱,前期研究已經(jīng)證實(shí)Omp25可以抑制巨噬細(xì)胞分泌TNF-α,然而,Omp25蛋白是否可以調(diào)控巨噬細(xì)胞IL-12的產(chǎn)生還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究擬以O(shè)mp25重組腺病毒rAd-Omp25感染THP-1細(xì)胞,經(jīng)過(guò)LPS/R848刺激,ELISA檢測(cè)Omp25對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 布魯氏菌與免疫反應(yīng)研究進(jìn)展
    1.1 布魯氏菌病原簡(jiǎn)介
    1.2 布魯氏菌病的流行特點(diǎn)
        1.2.1 傳染源和傳播途徑
        1.2.2 布魯氏菌的危害
    1.3 布魯氏菌的抗原與毒力因子
        1.3.1 布魯氏菌脂多糖
        1.3.2 布魯氏菌外膜蛋白
        1.3.3 布魯氏菌毒力相關(guān)因子
    1.4 IL-12與microRNA的功能
        1.4.1 IL-12功能
        1.4.2 microRNA的功能
    1.5 布魯氏菌與宿主的相互作用
    1.6 布魯氏菌逃逸宿主的抗感染免疫機(jī)制
        1.6.1 布魯氏菌逃避天然免疫
        1.6.2 布魯氏菌逃避適應(yīng)性免疫
    1.7 本研究的目的及意義
第二章 Omp25在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控IL-12的表達(dá)
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 試驗(yàn)儀器及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 Omp25對(duì)LPS/R848誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-12p70 的影響
        2.2.2 Omp25對(duì)LPS/R848誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)IL-12p35和p40 的影響
        2.2.3 Omp25對(duì)LPS/R848刺激的THP-1細(xì)胞中il12A和 il12B mRNA水平的影響
        2.2.4 Omp25對(duì)LPS/R848誘導(dǎo)的il12A和 il12B轉(zhuǎn)錄的影響
        2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 重組腺病毒rAd-Omp25感染誘導(dǎo)Omp25在THP-1細(xì)胞中的表達(dá)
        2.3.2 Omp25抑制LPS/R848誘導(dǎo)的IL-12p70 產(chǎn)生
        2.3.3 Omp25抑制LPS/R848誘導(dǎo)的IL-12p35 表達(dá)
        2.3.4 Omp25抑制LPS/R848誘導(dǎo)的IL-12p40 表達(dá)
        2.3.5 Omp25下調(diào)LPS/R848刺激細(xì)胞中il12B的 mRNA水平
        2.3.6 Omp25抑制il12B的轉(zhuǎn)錄而不影響il12A的轉(zhuǎn)錄
        2.3.7 Omp25抑制NF-κB p65的轉(zhuǎn)錄活性
        2.3.8 Omp25抑制IκB的磷酸化和NF-κB p65 的入核
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 Omp25蛋白通過(guò)PD-1誘導(dǎo)的miRNAs調(diào)控IL-12的表達(dá)
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 調(diào)控IL-12表達(dá)的miRNAs及其影響
        3.2.2 檢測(cè)單核/巨噬細(xì)胞中PD-1信號(hào)對(duì)IL-12的影響
        3.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 Omp25表達(dá)可上調(diào)miR-23b、miR-21-5p和miR-155的水平
        3.3.2 Omp25上調(diào)miR-23b、miR-21-5p和miR-155表達(dá)的特征
        3.3.3 miR-23b、miR-21-5p和miR-155對(duì)IL-12p40 和IL-12p35 表達(dá)的影響
        3.3.4 miR-23b、miR-21-5p和miR-155抑制劑對(duì)IL-12p40和IL-12p35表達(dá)的影響
        3.3.5 miR-23b、miR-21-5p和miR-155抑制劑對(duì)IL-12p70產(chǎn)生的影響
        3.3.6 miR-23b和miR-21-5p靶基因的篩選與鑒定
        3.3.7 miR-23b和miR-155對(duì)il12B mRNA、IL-12p40蛋白水平的調(diào)控作用
        3.3.8 miR-155靶蛋白的驗(yàn)證
        3.3.9 單核/巨噬細(xì)胞中PD-1信號(hào)對(duì)IL-12的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3937502