南江黃羊和波爾山羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖分化能力的比較
發(fā)布時(shí)間：2024-03-22 22:54
骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞(Skeletal muscle satellite cells, SMSCs)作為一種肌源性干細(xì)胞,對(duì)出生后骨骼肌的生長(zhǎng)和肌肉受損后修復(fù)有重要作用。本試驗(yàn)以初生南江黃羊和波爾山羊背最長(zhǎng)肌為材料,0.2%鏈酶蛋白酶消化后,采用Percoll液密度梯度離心法純化并通過(guò)形態(tài)學(xué)和PAX-7免疫熒光染色鑒定收集到的SMSCs。通過(guò)血球計(jì)數(shù)板和CCK-8試劑盒檢測(cè)比較南江黃羊和波爾山羊SMSCs 0-8 d9個(gè)階段的增殖能力；HE染色比較3-8d的SMSCs融合率。此外,為了獲得穩(wěn)定的內(nèi)參基因以定量目標(biāo)基因的表達(dá),利用qRT-PCR檢測(cè)了9個(gè)內(nèi)參基因(β-ACTIN, GAPDH, TOP2β、 YWHAZ, SDHA、PGK1、RP2、RPL4和HPRT1)在不同階段(1d、3d、4d和7 d)SMSCs中表達(dá)量并運(yùn)用geNorm軟件篩選。我們進(jìn)一步比較了SMSCs的標(biāo)志基因PAX-7、MYOD、MYOG及p38MAPK信號(hào)通路中主要基因(TAK1、MKK3、MKK6、p38MAPK, MEF2A和MEF2C)在兩個(gè)品種不同培養(yǎng)階段SMSCs (1 d、3 d、4 d和7 d)的...
【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
1.1 SMSCs概述
1.2 原代SMSCs的分離方法
1.3 SMSCs的純化
1.4 SMSCs的鑒定
1.4.1 形態(tài)學(xué)鑒定
1.4.2 標(biāo)志基因的鑒定
1.5 p38 MAPK信號(hào)通路的特征及功能
1.6 骨骼肌細(xì)胞中實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選
1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
2.1 試驗(yàn)材料
2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及樣品
2.1.2 主要耗材及常規(guī)器皿
2.1.3 主要試劑及配制
2.2 試驗(yàn)方法
2.2.1 山羊SMSCs的分離
2.2.2 山羊SMSCs的純化
2.2.3 山羊SMSCs的鑒定
2.2.3.1 SMSCs的形態(tài)學(xué)鑒定
2.2.3.2 SMSCs的免疫熒光染色
2.3 山羊SMSCs的凍存和復(fù)蘇
2.3.1 SMSCs的凍存
2.3.2 SMSCs的復(fù)蘇
2.4 山羊SMSCs的HE染色
2.5 山羊SMSCs增殖及融合率的檢測(cè)
2.5.1 血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)SMSCs的數(shù)目
2.5.2 CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞的增殖
2.5.3 SMSCs融合率的評(píng)估
2.6 熒光定量PCR
2.6.1 SMSCs總RNA的提取及cDNA的合成
2.6.2 山羊SMSCs內(nèi)參基因的篩選
2.6.3 山羊SMSCs中基因mRNA表達(dá)量的檢測(cè)
2.6.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)反應(yīng)
2.8 統(tǒng)計(jì)方法
3 結(jié)果與分析
3.1 山羊原代SMSCs的分離純化
3.2 山羊SMSCs的鑒定
3.2.1 山羊SMSCs的形態(tài)學(xué)特征
3.2.2 山羊SMSCs的PAX-7免疫熒光染色鑒定
3.3 南江黃羊和波爾山羊SMSCs增殖能力的比較
3.3.1 南江黃羊和波爾山羊SMSCs生長(zhǎng)過(guò)程中細(xì)胞數(shù)目的比較
3.3.2 南江黃羊和波爾山羊SMSCs吸光度(OD值)的比較
3.4 南江黃羊和波爾山羊SMSCs融合率的比較
3.5 南江黃羊和波爾山羊SMSCs中各基因mRNA的表達(dá)
3.5.1 山羊SMSCs中內(nèi)參基因的表達(dá)
3.5.2 南江黃羊和波爾山羊SMSCs標(biāo)志基因的表達(dá)
3.5.3 p38MAPK信號(hào)通路基因在南江黃羊和波爾山羊SMSCs中的表達(dá)
3.5.4 p38MAPK信號(hào)通路基因在南江黃羊和波爾山羊SMSCs中表達(dá)量的比較
3.5.5 p38MAPK信號(hào)通路基因表達(dá)量的相關(guān)性分析
4 討論
4.1 山羊高純度SMSCs的獲得
4.2 山羊SMSCs中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因
4.3 南江黃羊和波爾山羊SMSCs增殖分化能力的差異
4.3.1 南江黃羊SMSCs更高的增殖和融合能力
4.3.2 南江黃羊和波爾山羊SMSCs增殖和融合能力差異可能的分子機(jī)制
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
本文編號(hào)：3935071
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摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
1.1 SMSCs概述
1.2 原代SMSCs的分離方法
1.3 SMSCs的純化
1.4 SMSCs的鑒定
1.4.1 形態(tài)學(xué)鑒定
1.4.2 標(biāo)志基因的鑒定
1.5 p38 MAPK信號(hào)通路的特征及功能
1.6 骨骼肌細(xì)胞中實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選
1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
2.1 試驗(yàn)材料
2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及樣品
2.1.2 主要耗材及常規(guī)器皿
2.1.3 主要試劑及配制
2.2 試驗(yàn)方法
2.2.1 山羊SMSCs的分離
2.2.2 山羊SMSCs的純化
2.2.3 山羊SMSCs的鑒定
2.2.3.1 SMSCs的形態(tài)學(xué)鑒定
2.2.3.2 SMSCs的免疫熒光染色
2.3 山羊SMSCs的凍存和復(fù)蘇
2.3.1 SMSCs的凍存
2.3.2 SMSCs的復(fù)蘇
2.4 山羊SMSCs的HE染色
2.5 山羊SMSCs增殖及融合率的檢測(cè)
2.5.1 血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)SMSCs的數(shù)目
2.5.2 CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞的增殖
2.5.3 SMSCs融合率的評(píng)估
2.6 熒光定量PCR
2.6.1 SMSCs總RNA的提取及cDNA的合成
2.6.2 山羊SMSCs內(nèi)參基因的篩選
2.6.3 山羊SMSCs中基因mRNA表達(dá)量的檢測(cè)
2.6.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)反應(yīng)
2.8 統(tǒng)計(jì)方法
3 結(jié)果與分析
3.1 山羊原代SMSCs的分離純化
3.2 山羊SMSCs的鑒定
3.2.1 山羊SMSCs的形態(tài)學(xué)特征
3.2.2 山羊SMSCs的PAX-7免疫熒光染色鑒定
3.3 南江黃羊和波爾山羊SMSCs增殖能力的比較
3.3.1 南江黃羊和波爾山羊SMSCs生長(zhǎng)過(guò)程中細(xì)胞數(shù)目的比較
3.3.2 南江黃羊和波爾山羊SMSCs吸光度(OD值)的比較
3.4 南江黃羊和波爾山羊SMSCs融合率的比較
3.5 南江黃羊和波爾山羊SMSCs中各基因mRNA的表達(dá)
3.5.1 山羊SMSCs中內(nèi)參基因的表達(dá)
3.5.2 南江黃羊和波爾山羊SMSCs標(biāo)志基因的表達(dá)
3.5.3 p38MAPK信號(hào)通路基因在南江黃羊和波爾山羊SMSCs中的表達(dá)
3.5.4 p38MAPK信號(hào)通路基因在南江黃羊和波爾山羊SMSCs中表達(dá)量的比較
3.5.5 p38MAPK信號(hào)通路基因表達(dá)量的相關(guān)性分析
4 討論
4.1 山羊高純度SMSCs的獲得
4.2 山羊SMSCs中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因
4.3 南江黃羊和波爾山羊SMSCs增殖分化能力的差異
4.3.1 南江黃羊SMSCs更高的增殖和融合能力
4.3.2 南江黃羊和波爾山羊SMSCs增殖和融合能力差異可能的分子機(jī)制
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
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攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
本文編號(hào)：3935071
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