發(fā)布時(shí)間：2024-03-20 18:56

　　為了篩選能夠用于養(yǎng)豬生產(chǎn)中的潛在益生乳酸菌,試驗(yàn)從健康豬糞便中篩選出乳酸菌,并采用16S rDNA分子生物學(xué)方法進(jìn)行鑒定,然后進(jìn)一步對(duì)該菌株進(jìn)行體外生物學(xué)特性分析和小鼠致病性試驗(yàn)。結(jié)果表明:從豬糞便中共分離出3株疑似乳酸菌菌株,而后從3株疑似乳酸菌菌株中成功篩選出1株具有抗菌活性和生物被膜形成能力的乳酸菌,命名為L(zhǎng)-18,并確定乳酸菌L-18株為約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)。L-18株乳酸菌具有產(chǎn)酸能力,能夠耐受50℃和60℃、pH值2.0～10.0以及1%胰蛋白酶環(huán)境;對(duì)豬小腸上皮細(xì)胞的黏附率為77.04%,與鼠李糖乳桿菌ATCC53103相比差異顯著(P<0.05);在MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)大約4 h后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,并持續(xù)生長(zhǎng)8 h后進(jìn)入穩(wěn)定期;對(duì)青霉素等8種藥物高度敏感,對(duì)頭孢他定等6種藥物中度敏感,對(duì)慶大霉素等6種藥物表現(xiàn)出耐藥;小鼠致病性試驗(yàn)表明L-18株乳酸菌具有安全性,無毒性。說明L-18株乳酸菌具有益生菌的典型特性和功能,可用于開發(fā)和利用。

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【部分圖文】：

圖2分離株生物被膜形成能力測(cè)定結(jié)果

結(jié)果見圖2。由圖2可見,分離株L-18的OD590值極顯著大于陰性對(duì)照,而分離株L-51、L-38的OD590值與陰性對(duì)照相比差異不顯著(P>0.05),表明分離株L-18的生物被膜形成能力更強(qiáng),而分離株L-51、L-38的生物被膜形成能力較弱。

圖3分離株16SrDNA序列擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果見圖3和圖4。由圖3可見,以L-18株乳酸菌基因組DNA為模板,利用16SrDNA通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果在1500bp左右出現(xiàn)目的條帶。

圖4L-18株乳酸菌系統(tǒng)發(fā)育樹

將測(cè)序獲得的PCR產(chǎn)物序列(GenBank:MN252101)經(jīng)BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn),與納氏乳桿菌(Lactobacillusjohnsonii)具有100%的同源性;利用Mega6.0軟件,采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(見圖4),鑒定分離株L-18為約氏乳桿菌(Lactobac....

圖5L-18株乳酸菌產(chǎn)酸試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果見圖5。由圖5可見,陰性對(duì)照MRS肉湯初始pH值為6.76±0.06,培養(yǎng)48h后,L-18乳酸菌上清液的pH值為4.29±0.01,可見L-18乳酸菌上清液呈酸性,表明L-18乳酸菌具備產(chǎn)酸能力,與陰性對(duì)照相比差異極顯著(P<0.01)。

本文編號(hào)：3933149