發(fā)布時(shí)間：2024-03-16 16:02

　　新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽類的一種高度接觸性、急性、烈性傳染病,世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為必須報(bào)告的傳染病,我國將其列為一類動(dòng)物疫病。NDV只有單一血清型,但存在多種基因型,目前我國主要流行的是Class Ⅱ類型中基因Ⅶ毒株,常規(guī)疫苗株B1、Clone30、La Sota及V4疫苗株屬于基因Ⅰ型和Ⅱ型,不能有效防控基因Ⅶ型毒株。因此,應(yīng)迫切研發(fā)與當(dāng)前流行株基因型一致的新型疫苗。基于此,本研究對(duì)一株NDVHB株進(jìn)行了全基因組測(cè)序,以此為基礎(chǔ)建立了HB株的反向遺傳操作平臺(tái),并對(duì)其F蛋白進(jìn)行改造,旨在為研發(fā)基因Ⅶ型NDV弱毒疫苗提供科學(xué)依據(jù)。從河北省某發(fā)病雞場(chǎng)的臨床樣本中檢測(cè)到一株新城疫病毒,命名為HB,采用RT-PCR方法對(duì)HB株的全基因組序列進(jìn)行分段擴(kuò)增,并對(duì)其基因序列進(jìn)行結(jié)構(gòu)特性分析及同源進(jìn)化分析。結(jié)果表明HB株基因組全長為15192 bp,基因組3’端存在長為55 nt的引導(dǎo)序列,5’端存在長為114 nt的尾隨序列,主要編碼的6種結(jié)構(gòu)蛋白,包括基質(zhì)蛋白(M)、融合蛋白(F...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖４輔助質(zhì)粒構(gòu)建示意圖??

同源序列；通??過別〇?Ｉ和１雙酶切ｐＣＩ－ｎｅｏ載體，然后利用同源重組技術(shù)將ＮＰ蛋白、Ｐ蛋白分別連接至??真核表達(dá)載體ｐＣ丨－ｎｅｏ中，因?yàn)椋袒虻模希遥崎L約６．７?ｋｂ，因此采用分段克隆方式，將Ｌ基因??分為２段擴(kuò)增，分別命名為Ｌｌ、Ｌ２，再利用同源重組技術(shù)與ｐＣＩ－ｎｅｏ進(jìn)....

圖３?ｐＣＩ－ｎｅｏ載體示意圖??Ｆｉｇ３?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｐＣＩ－ｎｅｏ?ｖｅｃｔｏｒ??

?基因ＶＩＩ型ＮＤＶ弱毒株感染性克隆的構(gòu)建及病毒拯救???ａｇｉｎ??ｊＴ?ＣＭＶ?：?Ｐ，…???，＾ｙ?Ｅｎｈａｎｃｅｒ／Ｐｒｏｍｏｔｅｒ＾＾／?／?Ｕ?Ｊ．??／?／?／?／?Ｎｈｅｌ?ｔＧ６６??／／?Ｓ，，?ｊ｜??＾?ｗＷ＼?Ｂ?！ｉｌ??＼?（吻）?ｎ＼＾?�。海�?....

圖５?ＰＯＫ１２載體改造策略??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ｓｔｒａｔｅｇｙ?ｏｆ?ｍｏｄｉｆｙ?Ｐ０ＫＩ２?ｖｅｃｔｏｒ??

ＡＡＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＣＡＡＣＡＴ?丁?ＧＣ－３’?３３３４??Ｌ２－Ｆ?５，－ＴＴＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＴＴＴＴＣＴＴＡＴＣＣＡＡＴＡＧＡＴＣＣＡＡＣＣＡＣＣＣ－３，??３４２９??Ｌ２－Ｒ?５，－ＣＡＴＧＴＣＴＧＣＴＣＧＡＡＧＣＧＧＣＣＴＴＴＴＴＴＣＴＡＡＴＣＴＧ....

圖６內(nèi)部基因構(gòu)建策略??Ｆｉｇ．６?Ｔｈｅ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｓｔｒａｔｅ＾?Ｉｎｔｅｒｎａｌ?ｇｅｎｅ??

進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序正確的中間質(zhì)粒保存?zhèn)溆谩??２．２．６內(nèi)部基因的構(gòu)建??將內(nèi)部基因（ＮＰ、Ｐ和Ｌ基因）分為Ｆ３、Ｆ４和Ｆ５片段，在Ｈ片段的５’端通過引物引入??Ｔ７啟動(dòng)子核苷酸序列和與載體連接的同源序列，３’端引入Ｆ４片段的同源序列；在？４片段的５＇??端引入Ｆ５片段的同源序列，....

本文編號(hào)：3929775