小反芻獸疫(Peste des petits ruminants, PPR)是由小反芻獸疫病毒(Peste des petits ruminants virus, PPRV)引起的一種高度接觸性傳染的病毒性疾病,主要感染小反芻動(dòng)物,對(duì)畜牧業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)危害,是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(ore)規(guī)定必須上報(bào)的疫病。目前主要依靠弱毒疫苗進(jìn)行預(yù)防,但該類疫苗難以利用血清學(xué)方法區(qū)分疫苗免疫和野毒感染動(dòng)物,不利于該病的控制和消滅,而且弱毒疫苗還存在著毒力返強(qiáng)的安全隱患。因此,研發(fā)安全、有效的新型疫苗尤為重要。病毒樣顆粒由于在結(jié)構(gòu)上與天然病毒相似,并且不含核酸,從而具有很好的免疫原性和安全性,作為新型亞單位疫苗在人類和動(dòng)物疫苗領(lǐng)域得到廣泛研究。本研究利用桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建了表達(dá)PPRV H或F蛋白的病毒樣顆粒,并在小鼠和山羊上進(jìn)行了免疫原性的初步研究。由于桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)可以對(duì)表達(dá)的外源蛋白進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加工和多種修飾,表達(dá)的蛋白質(zhì)具有與天然蛋白質(zhì)相似的生物學(xué)活性,基于以上優(yōu)點(diǎn),該系統(tǒng)特別適合有囊膜病毒VLP的制備。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了同時(shí)表達(dá)小反芻獸疫病毒的M、N、H和F蛋白的重組桿狀病毒和...

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 小反芻獸疫病毒的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 PPR的致病性和地理分布
        1.1.2 PPRV基因組結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性
        1.1.3 PPRV感染的診斷方法
        1.1.4 PPRV疫苗的研究
    1.2 病毒樣顆粒的研究進(jìn)展
        1.2.1 VLP的表達(dá)系統(tǒng)
        1.2.2 VLP在基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用
        1.2.3 VLP在疫苗研究中的應(yīng)用
    1.3 副黏病毒出芽機(jī)制研究進(jìn)展
        1.3.1 M蛋白在副黏病毒顆粒組裝中的中心作用
        1.3.2 糖蛋白在副黏病毒顆粒組裝中的作用
        1.3.3 N蛋白在副黏病毒顆粒組裝中的作用
    1.4 研究目的和意義
第二章 PPRV病毒樣顆粒的制備
    摘要
    2.1 材料和方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 PPRV的繁殖和病毒滴度的測(cè)定
        2.1.3 PPRV結(jié)構(gòu)基因的RT-PCR擴(kuò)增
        2.1.4 PPRV結(jié)構(gòu)基因的克隆與鑒定
        2.1.5 重組供體質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.1.6 重組穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.1.7 重組穿梭質(zhì)粒的提取
        2.1.8 重組穿梭質(zhì)粒的鑒定
        2.1.9 重組桿狀病毒的制備和滴定
        2.1.10 重組蛋白在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的檢測(cè)
        2.1.11 PPRV結(jié)構(gòu)蛋白的大量表達(dá)和蔗糖密度梯度離心純化
        2.1.12 PPRV病毒樣顆粒的特性鑒定
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 PPRV滴度
        2.2.2 重組供體質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.2.3 重組穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.2.4 重組桿狀病毒滴度
        2.2.5 重組蛋白表達(dá)的檢測(cè)
        2.2.6 透射電鏡
    2.3 討論
第三章 PPRV病毒樣顆粒對(duì)小鼠和山羊的免疫原性研究
    摘要
    3.1 材料和方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 免疫用抗原的準(zhǔn)備
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫和樣品采集
        3.1.4 PPRV特異性抗體檢測(cè)
        3.1.5 基于PPRV N單抗的競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)
        3.1.6 血清中和抗體檢測(cè)
        3.1.7 淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        3.1.8 小鼠IFN-γ的ELISPOT分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 PPRV VLPs的制備和鑒定
        3.2.2 免疫小鼠PPRV特異性抗體檢測(cè)
        3.2.3 免疫小鼠PPRV中和抗體檢測(cè)
        3.2.4 免疫小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)
        3.2.5 免疫小鼠IFN-γ ELISPOT結(jié)果
        3.2.6 免疫山羊PPRV特異性抗體檢測(cè)結(jié)果
        3.2.7 免疫山羊PPRV特異性中和抗體結(jié)果
        3.2.8 免疫山羊淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)
    3.3 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3928964