脂肪組織對動物機(jī)體中能量的儲存、調(diào)節(jié)代謝發(fā)揮重要作用。脂肪組織在動物機(jī)體中的沉積與肉質(zhì)中含量比例也是遺傳育種研究的重要課題。動物脂肪的生成受多種因素調(diào)節(jié)，基因、酶活性和激素等。隨著研究的深入，脂肪細(xì)胞的增殖與分化受microRNA(miRNA)不同程度的調(diào)節(jié)，其通過與脂肪細(xì)胞分化相關(guān)靶基因mRNA特定位點(diǎn)結(jié)合而降解其mRNA或抑制蛋白的合成而發(fā)揮調(diào)控作用。并且已有研究報(bào)道，miR-378對3T3-L1細(xì)胞系有促進(jìn)分化作用，但是其在原代分離培養(yǎng)前體脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)理尚不清楚。 為探討miR-378對牛前體脂肪細(xì)胞分化過程中的調(diào)控作用，我們在牛不同組織中檢測miR-378表達(dá)規(guī)律，發(fā)現(xiàn)在前體脂肪細(xì)胞中具有一定的表達(dá)豐度，同時在心臟、脾臟、小腸中也有較高表達(dá)水平。將前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，檢測到miR-378表達(dá)水平在分化形成脂滴后顯著上調(diào)，揭示了miR-378在牛各組織及前體脂肪細(xì)胞分化過程中的表達(dá)規(guī)律。 研究miR-378在前體脂肪細(xì)胞中發(fā)揮調(diào)控靶基因的作用與功能，結(jié)合生物信息學(xué)與體外雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)，miR-378可抑制E2F2、RANBP103’-UTR雙熒光素酶重組質(zhì)粒...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖1.1miRNA的生物合成過程

了Drosha之外還有一種雙鏈RNA結(jié)合蛋白Pasha(partnero對Drosha的切割作用有協(xié)同作用[9]。轉(zhuǎn)運(yùn):細(xì)胞核中高濃度的RanGTP促進(jìn)Exportin5(Exp5)使NA并將其轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)中。然后Exp5與pre-miRNA....

圖1.2莖環(huán)引物Real-TimePCR原理

此檢測miRNA需要設(shè)計(jì)特異性頸環(huán)引物。miRNApre-轉(zhuǎn)錄本等特點(diǎn)增大了反轉(zhuǎn)錄引物設(shè)計(jì)難度。m兩種，第一種方法，是通過一段與已知miRNA3’端互補(bǔ)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)的通用序列。這種結(jié)構(gòu)阻止了m結(jié)合，使得特異性增加。第二種方法，將miRNA后再加上通用序列設(shè)計(jì)反轉(zhuǎn)錄引....

圖1.3psiCHECK-2載體結(jié)構(gòu)

預(yù)測網(wǎng)站各有優(yōu)缺點(diǎn)，結(jié)果也存在交集，所以如的準(zhǔn)確率。但是這些網(wǎng)站只是進(jìn)行預(yù)測工作，后子生物學(xué)方法來實(shí)現(xiàn)。位點(diǎn)的驗(yàn)證酶報(bào)告分析篩預(yù)測出靶基因后，便要進(jìn)行分子生物學(xué)驗(yàn)證。mRNA之間的相互結(jié)合關(guān)系來進(jìn)行驗(yàn)證。操作原UTR靶位點(diǎn)克隆到熒光素酶報(bào)告載體中，重組質(zhì)轉(zhuǎn)染入細(xì)胞系中，檢測....

圖2.1脂肪細(xì)胞的起源與分化

圖2.1脂肪細(xì)胞的起源與分化Fig.2.1ThegenesisanddifferentiationofadipocytesiRNA調(diào)控前體脂肪細(xì)胞分化有研究發(fā)現(xiàn)，大量參與調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的基因是一些miRNA的靶些miRNA也在某些程度上促進(jìn)或抑制脂肪細(xì)胞....

本文編號：3927639