附紅細胞體病(Eperythrozoonis)是由附紅細胞體(Eperythrozoon, E)寄生于不同的脊椎動物,包括嚙齒類,反芻動物以及豬在內(nèi)的宿主的骨髓,紅細胞表面等處引發(fā)的一種人畜共患性疾病。據(jù)報道,它可以感染十幾種溫血動物,并在全球十幾個國家發(fā)生和流行。豬附紅細胞體病臨床上的感染豬多數(shù)呈慢性感染,通常無明顯臨床特征而難于做出及時的診斷,致使豬附紅細胞體在群內(nèi)或者群間傳播,由于其的免疫抑制性,當(dāng)豬群發(fā)生強烈應(yīng)激、或者發(fā)生其它傳染病時,會增加單獨發(fā)病或與其它疾病并發(fā)或繼發(fā)感染的可能性,使整個豬群的病癥復(fù)雜化,病情加重、甚至死亡,而造成經(jīng)濟方面的負面影響。 目前,針對豬附紅細胞體病的診斷方法主要有血涂片染色鏡檢法、血清學(xué)診斷、分子生物學(xué)診斷方法。血涂片等病原鏡檢診斷方法主觀性強,準確性差。分子生物學(xué)診斷方法較其它方法更為敏感和準確,但其昂貴、耗時間長且不適用于規(guī)模化豬場流行病學(xué)監(jiān)測。血清學(xué)診斷方法中酶聯(lián)免疫吸附試驗作為一種高效,快速,特異的診斷方法被廣泛應(yīng)用于此病的流行病學(xué)調(diào)查以及監(jiān)測中。本實驗利用三種在豬附紅細胞體中與紅細胞膜粘附有關(guān)且具有良好免疫原性的蛋白建立了間接ELISA...

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 豬附紅細胞體病的診斷方法
        1.1.1 豬附紅細胞體病的病原學(xué)診斷方法
        1.1.2 免疫學(xué)診斷
        1.1.3 分子生物學(xué)診斷
    1.2 國內(nèi)外流行病學(xué)調(diào)查
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 主要的儀器與設(shè)備
    3.2 實驗材料
    3.3 主要溶液的配制
        3.3.1 SDS-PAGE緩沖液
        3.3.2 培養(yǎng)基
        3.3.3 ELISA緩沖液
        3.3.4 其它溶液
    3.4 實驗方法
        3.4.1 重組蛋白的表達與SDS-PAGE檢測
        3.4.2 重組蛋白ELISA檢測方法的操作步驟
        3.4.3 MSG1-ELISA操作步驟
        3.4.4 PCR方法檢測病原
    3.5 重組蛋白PFK-ELISA、ALD-ELISA、GAPDH-ELISA檢測方法的建立
        3.5.1 抗原最佳包被濃度與血清稀釋度的確定
        3.5.2 最佳封閉液濃度和最佳封閉時間的確定
        3.5.3 血清最佳作用時間的確定
        3.5.4 酶標二抗的最佳工作濃度和最佳作用時間的確定
        3.5.5 ELISA判定標準的確定
    3.6 PFK-ELISA、ALD-ELISA、GAPDH-ELISA與MSG1-ELISA的比較
    3.7 湖北省及周邊地區(qū)規(guī)�；i場豬附紅細胞體病流行病學(xué)調(diào)查
4 實驗結(jié)果
    4.1 PFK、ALD、GAPDH可溶性重組蛋白的提取和純化
    4.2 重組蛋白PFK-ELISA、ALD-ELISA、GAPDH-ELISA檢測方法的建立
        4.2.1 抗原最佳包被濃度與血清稀釋度的確定
        4.2.2 最佳封閉液濃度和最佳封閉時間的確定
        4.2.3 血清最佳作用時間的確定
        4.2.4 酶標二抗最佳工作濃度和最佳作用時間的確定
        4.2.5 ELISA判定標準的確定
    4.3 PFK-ELISA、ALD-ELISA、GAPDH-ELISA與MSG1-ELISA的比較
    4.4 湖北省及周邊地區(qū)規(guī)�；i場豬附紅細胞體病流行病學(xué)調(diào)查
        4.4.1 規(guī)�；i場不同年齡階段豬的豬附紅細胞體病流行病學(xué)調(diào)查
        4.4.2 規(guī)模化豬場不同季節(jié)豬附紅細胞體病的流行病學(xué)調(diào)查
5 討論
    5.1 豬附紅細胞體病檢測方法的選擇
    5.2 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果分析與討論
6 結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3924542