豬偽狂犬病（porcine Pseudorabies, PR）是由豬皰疹病毒Ⅰ型(pseudorabiesvirus,PRV)引起豬的一種急性傳染病。該病已在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。結(jié)合相應(yīng)的鑒別診斷方法，并采取相應(yīng)的控制措施是預(yù)防該病的有效手段。gE糖蛋白是其主要的毒力因子之一，gE基因的缺失可以使PRV毒力大大降低，但不影響其免疫原性。目前gE基因缺失弱毒株已經(jīng)在世界各國廣泛使用。由于缺失疫苗與野毒株之間在gE基因上的差別，因此，gE基因可以區(qū)分疫苗免疫和野毒感染。本研究克隆表達(dá)了gE的主要抗原表位區(qū)，并將其作為包被抗原，建立了快速檢測豬偽狂犬病的血清學(xué)診斷方法。 根據(jù)GenBank中已發(fā)表的豬偽狂犬病毒gE全基因序列，設(shè)計合成一對特異性引物，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增gE全基因，克隆后進(jìn)行序列測定，測序正確的質(zhì)粒命名為PRV-gE。根據(jù)gE糖蛋白及原核表達(dá)載體pET32a的特點(diǎn)，選取一段抗原性較高的序列用Primer5.0軟件設(shè)計另一對特異性引物。從重組質(zhì)粒PRV-gE中擴(kuò)增gE基因抗原性較高的序列（gE，），將其與原核表達(dá)載體pET32a連接，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pE...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1PRV-gE全基因的PCR擴(kuò)增100bpM.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL5000；1.酶切產(chǎn)物M.DNAMarkerDL5000；1.productsofenzymedigestion

偽狂犬病毒gE基因亞克隆、原核表達(dá)及ELISA抗體檢測方法的建立3結(jié)果與分析全基因擴(kuò)增及鑒定全基因擴(kuò)增及酶切鑒定因組DNA后用gE全基因引物p1、p2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得了與預(yù)期大小相異性目的條帶（圖1）。gE基因克隆至pMD19-T載體后，....

圖5pMD-gE，基因的PCR鑒定M.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL5000；1.酶切產(chǎn)物M.DNAMarkerDL5000；1.productsofenzymedigestion100bp

gE優(yōu)勢抗原表位的克隆及原核表達(dá)gE優(yōu)勢抗原表位的擴(kuò)增及克隆蛋白的主要抗原表位區(qū)選取抗原性較高的750bp基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增D19-T載體，用限制性內(nèi)切酶BamHI和HindIII對重組質(zhì)粒進(jìn)行雙相符的約750bp（目的片段）和2692bp（載....

圖4豬偽狂犬病毒gE基因系統(tǒng)進(jìn)化樹

.1.2PRVgE優(yōu)勢抗原表位的克隆及原核表達(dá).1.2.1PRVgE優(yōu)勢抗原表位的擴(kuò)增及克隆根據(jù)gE蛋白的主要抗原表位區(qū)選取抗原性較高的750bp基因進(jìn)行PCR克隆至pMD19-T載體，用限制性內(nèi)切酶BamHI和HindIII對重組質(zhì)粒進(jìn)行預(yù)期....

圖3豬偽狂犬病毒gE蛋白氨基酸序列同源性分析

E優(yōu)勢抗原表位的克隆及原核表達(dá)E優(yōu)勢抗原表位的擴(kuò)增及克隆蛋白的主要抗原表位區(qū)選取抗原性較高的750bp基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增（圖圖4豬偽狂犬病毒gE基因系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.4PhyleticevolutiontreeofPRV-gEproteang....

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