白介素18(IL-18)可以誘導(dǎo)IFN-γ分泌,促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞的增殖分化,具有良好的抗病毒活性。為探究貓IL-18的生物學(xué)活性,本研究采用水泡性口炎病毒(VSV)聯(lián)合poly I:C共同刺激實(shí)驗(yàn)貓,采用常規(guī)方法分離貓脾淋巴細(xì)胞,提取總RNA,經(jīng)RT-PCR方法獲得大小為579 bp的貓IL-18基因。構(gòu)建了可溶性表達(dá)貓IL-18的重組大腸桿菌pCold-IL-18/BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo),SDS-PAGE分析結(jié)果顯示,重組菌表達(dá)了約70 ku的重組蛋白。重組蛋白經(jīng)3C蛋白酶處理后并通過(guò)Ni柱親和純化,獲得了可溶性表達(dá)的重組貓IL-18(rIL-18)。取BALB/c小鼠和貓的脾淋巴細(xì)胞,經(jīng)不同濃度rIL-18刺激,采用MTT法檢測(cè)rIL-18促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖活性,結(jié)果顯示可溶性表達(dá)的rIL-18能夠有效地促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖;采用細(xì)胞病變抑制法檢測(cè)rIL-18協(xié)同干擾素的抗病毒效果,結(jié)果顯示rIL-18聯(lián)合臨床用干擾素可顯著增強(qiáng)抗病毒效果。本研究為治療貓病毒性疾病奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。

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圖1貓IL-18基因的RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

重組菌pCold-IL-18/BL21經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，超聲裂解菌體后經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)，結(jié)果顯示，在約70ku處表達(dá)出目的蛋白（圖3A）。采用His標(biāo)簽蛋白Ni柱親和純化重組蛋白，將純化的重組蛋白進(jìn)一步經(jīng)3C蛋白酶處理后，再次利用His標(biāo)簽蛋白Ni柱親和純化，獲得目的蛋白貓....

圖2重組質(zhì)粒pCold-IL-18的雙酶切鑒定結(jié)果

圖1貓IL-18基因的RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果圖3rIL-18蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及純化的SDS-PAGE結(jié)果

圖3rIL-18蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及純化的SDS-PAGE結(jié)果

圖2重組質(zhì)粒pCold-IL-18的雙酶切鑒定結(jié)果2.3貓rIL-18促脾淋巴細(xì)胞增殖活性檢測(cè)結(jié)果分

圖4貓rIL-18促脾淋巴細(xì)胞增殖活性的檢測(cè)結(jié)果

離BALB/c鼠和貓脾淋巴細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)后，分別經(jīng)不同濃度的rIL-18刺激，采用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果顯示，貓rIL-18能夠促進(jìn)BALB/c小鼠和貓脾淋巴細(xì)胞增殖，當(dāng)濃度為50μg/mL時(shí)促淋巴細(xì)胞增殖活性最強(qiáng)（圖4），表明可溶性表達(dá)的貓rIL-18具有促....

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