禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的禽類感染綜合征，該病全球范圍內(nèi)皆有發(fā)生，其中，H5N1亞型高致病性禽流感(HPAI)以其高發(fā)病率和高死亡率而嚴(yán)重威脅著家禽養(yǎng)殖業(yè)。DNA疫苗被稱為“第三代疫苗”，因其能夠同時(shí)產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)、具有良好的交叉免疫保護(hù)力，被認(rèn)為是應(yīng)對(duì)和抵御禽流感病毒(AIV)頻繁變異最理想的疫苗。 為了研制能夠抵御H5N1亞型不同分支毒株攻擊的通用型疫苗，對(duì)我國(guó)近年來分離到的H5N1亞型AIV的HA蛋白和NA蛋白的氨基酸序列進(jìn)行了比對(duì)分析，獲得了一條同義HA蛋白序列和一條同義NA蛋白序列，并分別構(gòu)建了3種基于同義蛋白的DNA疫苗：pCons-CHA，pCons-CNA和pCons-CHANA。將構(gòu)建好的3種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，間接免疫熒光和Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，同義HA蛋白和同義NA蛋白均可以在293T細(xì)胞中表達(dá)，并且表達(dá)產(chǎn)物可以同H5N1亞型不同毒株的陽(yáng)性血清發(fā)生特異性的反應(yīng)，為進(jìn)一步的免疫評(píng)價(jià)奠定了基礎(chǔ)。 為了探索最佳的免疫方式，對(duì)同義HA質(zhì)粒、同義HA和NA混合質(zhì)粒以及共表達(dá)同義HA、NA質(zhì)粒的交叉免疫保護(hù)效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。將30g pCo...

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 禽流感病毒概述
        1.1.1 禽流感的病原學(xué)
        1.1.2 禽流感病毒血凝素
        1.1.3 禽流感病毒神經(jīng)氨酸酶(NA)及對(duì) NA 的免疫應(yīng)答
        1.1.4 禽流感病毒的傳播及其對(duì)人類健康的影響
    1.2 禽流感疫苗研究進(jìn)展
        1.2.1 全病毒滅活苗
        1.2.2 亞單位疫苗
        1.2.3 重組活載體疫苗
        1.2.4 反向遺傳疫苗
    1.3 DNA 疫苗的研究進(jìn)展
        1.3.1 DNA 疫苗的主要特點(diǎn)
        1.3.2 DNA 疫苗的基本原理
        1.3.3 流感病毒 DNA 疫苗研究進(jìn)展
        1.3.4 提高 DNA 疫苗免疫原性的方式
    1.4 本研究的目的與意義
第二章 表達(dá) H5N1 亞型 AIV 同義 HA 和 NA 蛋白重組質(zhì)粒的構(gòu)建及體外表達(dá)
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌株，細(xì)胞與質(zhì)粒
        2.1.2 酶及主要試劑
        2.1.3 血清與抗體
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 H5 亞型 AIV 同義 HA 蛋白及同義 NA 蛋白氨基酸同義序列分析與合成
        2.1.6 重組質(zhì)粒 pCons-CHA, pCons-CNA 的構(gòu)建與鑒定
        2.1.7 共表達(dá)同義 HA 和 NA 基因重組質(zhì)粒 pCons-CHANA 的構(gòu)建與鑒定
        2.1.8 間接 NA-ELISA 檢測(cè)方法的建立
        2.1.9 重組質(zhì)粒體外表達(dá)的間接免疫熒光鑒定
        2.1.10 重組蛋白的 Western Blot 鑒定
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 重組質(zhì)粒 pCons-CHA, pCons-CNA 的鑒定
        2.2.2 重組質(zhì)粒 pCons-CHANA 的鑒定
        2.2.3 重組質(zhì)粒 pGEX-CNA 的鑒定
        2.2.4 間接 NA-ELISA 檢測(cè)方法的建立
        2.2.5 間接免疫熒光(IFA)檢測(cè)結(jié)果
        2.2.6 Western Blot 鑒定結(jié)果
    2.3 討論
第三章 不同 DNA 疫苗(組合)對(duì) SPF 雞的免疫效力評(píng)估
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒、抗原
        3.1.2 DNA 疫苗
        3.1.3 SPF 雞胚和 SPF 雞
        3.1.4 病毒雞胚半數(shù)致死量 EID50的測(cè)定
        3.1.5 試驗(yàn)分組情況
        3.1.6 SPF 雞免疫方法與免疫程序
        3.1.7 HI 抗體的測(cè)定
        3.1.8 NA-ELISA 抗體的測(cè)定
        3.1.9 攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        3.1.10 病毒分離與滴定
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 雞胚半數(shù)致死量 EID50的測(cè)定
        3.2.2 DNA 疫苗超螺旋含量的檢測(cè)
        3.2.3 不同疫苗(組合)對(duì) DK/GD/322/2010 的免疫保護(hù)效力評(píng)估
        3.2.4 不同疫苗(組合)對(duì) DK/HuB/S1513/2010 的免疫保護(hù)效率評(píng)估
        3.2.5 不同疫苗(組合)對(duì) CK/SD/A-10/2011 的免疫保護(hù)效率評(píng)估
        3.2.6 不同疫苗(組合)對(duì) DK/FJ/31/2007 的免疫保護(hù)效率評(píng)估
    3.3 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3914003