動(dòng)物衣原體病是由各類(lèi)衣原體感染哺乳動(dòng)物、禽類(lèi)和人所引起的一類(lèi)疾病的總稱(chēng)。因該類(lèi)疾病對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展、動(dòng)物產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易和人類(lèi)健康等公共衛(wèi)生領(lǐng)域易造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,故而對(duì)該類(lèi)疾病的研究越發(fā)受到相關(guān)部門(mén)和國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。傳統(tǒng)衣原體診斷方法存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、對(duì)操作人員和儀器設(shè)備要求高、檢測(cè)靈敏度有限以及檢測(cè)衣原體種類(lèi)范圍有限而導(dǎo)致漏檢的不足,故亟需建立一種快速準(zhǔn)確的衣原體診斷方法。 本研究采用新型核酸擴(kuò)增技術(shù),即環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技術(shù),建立衣原體通用檢測(cè)方法。根據(jù)LAMP反應(yīng)原理,針對(duì)衣原體共有特定的保守區(qū)域設(shè)計(jì)通用的2對(duì)基因的內(nèi)、外引物和1對(duì)環(huán)引物。使用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320儀對(duì)反應(yīng)進(jìn)程中的濁度實(shí)時(shí)監(jiān)控,對(duì)影響LAMP反應(yīng)效率的重要參數(shù)(反應(yīng)溫度和內(nèi)引物濃度)進(jìn)行優(yōu)化,確定本方法的最佳反應(yīng)體系和反應(yīng)條件。通過(guò)特異性試驗(yàn)和靈敏度試驗(yàn)對(duì)本方法的特異性和靈敏度進(jìn)行探索；利用同一批次和不同批次提取的標(biāo)準(zhǔn)株沙眼衣原體DNA驗(yàn)證本方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性；添加特殊的染料...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 衣原體概況
        1.1.1 生物學(xué)特性
            1.1.1.1 形態(tài)結(jié)構(gòu)與生長(zhǎng)周期
            1.1.1.2 培養(yǎng)特性
            1.1.1.3 抗原和感染機(jī)制
            1.1.1.4 抵抗力
        1.1.2 衣原體流行病學(xué)特點(diǎn)
        1.1.3 衣原體病理學(xué)研究進(jìn)展
        1.1.4 衣原體基因組的研究
        1.1.5 衣原體蛋白組學(xué)的研究
    1.2 衣原體診斷技術(shù)研究進(jìn)展
    1.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
        1.3.1 引物設(shè)計(jì)
        1.3.2 LAMP反應(yīng)原理
        1.3.3 LAMP方法特點(diǎn)
        1.3.4 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的應(yīng)用
        1.3.5 LAMP方法與其他方法的聯(lián)合應(yīng)用
    1.4 研究目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 試驗(yàn)毒株
        2.1.2 主要儀器設(shè)備與試劑
    2.2 方法
        2.2.1 衣原體序列分析及LAMP引物設(shè)計(jì)
        2.2.2 衣原體的增殖培養(yǎng)
        2.2.3 衣原體基因組提取及其基因組的鑒定
        2.2.4 衣原體通用LAMP檢測(cè)體系的建立及優(yōu)化
            2.2.4.1 引物驗(yàn)證
            2.2.4.2 溫度優(yōu)化
            2.2.4.3 內(nèi)引物優(yōu)化
        2.2.5 LAMP特異性試驗(yàn)
        2.2.6 LAMP靈敏度試驗(yàn)
        2.2.7 重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)
        2.2.8 LAMP目測(cè)法的建立
            2.2.8.1 目測(cè)法特異性驗(yàn)證
            2.2.8.2 目測(cè)法靈敏度試驗(yàn)
        2.2.9 與其他四種分子生物學(xué)方法比較試驗(yàn)
            2.2.9.1 五種檢測(cè)方法特異性及衣原體檢測(cè)范圍的比較
            2.2.9.2 LAMP方法的敏感度與3種PCR檢測(cè)方法進(jìn)行比較
            2.2.9.3 LAMP方法及3種PCR方法用于臨床樣本檢測(cè)的比較
第三章 試驗(yàn)結(jié)果
    3.1 衣原體基因組序列分析及LAMP引物設(shè)計(jì)
    3.2 衣原體基因組的鑒定
    3.3 衣原體通用LAMP檢測(cè)體系的建立及優(yōu)化
        3.3.1 引物驗(yàn)證
        3.3.2 溫度優(yōu)化
        3.3.3 內(nèi)引物濃度優(yōu)化
    3.4 LAMP特異性試驗(yàn)
    3.5 LAMP靈敏度試驗(yàn)
    3.6 LAMP重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)
    3.7 衣原體LAMP目測(cè)法的建立及與LA-320C儀器檢測(cè)結(jié)果比較
        3.7.1 目測(cè)法特異性試驗(yàn)
        3.7.2 目測(cè)法靈敏度試驗(yàn)
    3.8 衣原體通用LAMP檢測(cè)方法與文獻(xiàn)報(bào)道的4種分子生物學(xué)方法比較試驗(yàn)
        3.8.1 LAMP及4種PCR方法特異性比較試驗(yàn)
        3.8.2 LAMP與3種PCR檢測(cè)方法靈敏度比較試驗(yàn)
        3.8.3 應(yīng)用于臨床檢測(cè)的比較
第四章 討論
    4.1 衣原體通用LAMP檢測(cè)方法的建立
    4.2 衣原體通用LAMP目測(cè)法的建立
    4.3 通用LAMP方法與4種其他學(xué)檢測(cè)方法的比較
    4.4 方法的進(jìn)一步完善
    4.5 后續(xù)工作建議
    4.6 展望
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表文章、參與的科研項(xiàng)目情況



本文編號(hào)：3911851