為分離臨床型奶牛乳房炎中的腸球菌,檢測其耐藥性和攜帶毒力基因的情況,本試驗采集了甘肅省東、中和西部3個地區(qū)41頭臨床型乳房炎奶牛的奶樣93份,并構(gòu)建了腸球菌毒力基因的原核表達載體。試驗使用選擇性培養(yǎng)基分離純化腸球菌,16S rRNA和生化試驗結(jié)合的方法鑒定所分離菌株的種;選取16種抗菌藥進行藥敏試驗;常規(guī)PCR方法檢測11種毒力基因的攜帶情況,最后對具有免疫原性的毒力基因進行原核表達載體的構(gòu)建。鑒定結(jié)果顯示,93份乳樣中18株為腸球菌,并分為9種。藥敏結(jié)果顯示,分離株多數(shù)為多重耐藥菌(multiple resistant bacteria,MDR),占88.89%,未發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素菌株(vancomycin-resistant enterococcus,VRE),萬古霉素敏感率94.12%,所有分離株至少對一種抗菌藥耐藥。PCR檢測結(jié)果表明,11種毒力基因均有檢出,cob基因檢出率最高(44.44%),efaA、hyl、ccf和esp基因檢出率分別為33.33%、27.78%、27.78%和22.22%,Asa1、cylA、EF3314和gelE基因檢出率均為16.67%,Ace和cy...

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圖1不同種類抗生素敏感性

表3菌株分離結(jié)果Table3Resultsofstrainisolation菌株種類Strains地區(qū)Regions編號Serialnumber天水Tianshui定西Dingxi蒙氏腸球菌E.mundii80TS1～TS8屎腸球菌E.....

圖2毒力基因PCR檢測結(jié)果

表4腸球菌溶血類型和數(shù)量Table4Typeandquantityofenterococcalhemolysis菌株種類Strains溶血類型Hemolytictypesαβγ屎腸球菌E.faecium020糞腸球菌E.faecalis....

圖3部分腸球菌16SrRNA擴增結(jié)果

由圖3可知,所有分離株16SrRNA擴增長度在1400～1500bp。由圖4可知,構(gòu)建的進化樹分為4個類型,8株蒙氏腸球菌除TS4外其他的在一個大分支上;TS9(屎腸球菌)、TS10(屎腸球菌)、TS11(血棲腸球菌)、TS12(血棲腸球菌)、TS14(小腸腸球菌)、TS....

圖4腸球菌16SrRNA系統(tǒng)發(fā)育進化樹

圖3部分腸球菌16SrRNA擴增結(jié)果2.6原核表達載體構(gòu)建

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