為表達(dá)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲P450蛋白并分析其生物信息學(xué)特性,本研究利用RT-PCR擴(kuò)增捻轉(zhuǎn)血矛線蟲P450基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET-P450,經(jīng)雙酶切鑒定,將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,采用SDS-PAGE檢測(cè)P450蛋白的表達(dá);利用生物信息學(xué)軟件對(duì)P450蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,正確構(gòu)建了重組質(zhì)粒p ET-P450且P450蛋白以包涵體的形式表達(dá)。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,P450蛋白分子式為C₁₁₅₄H₁₈₁₂N₃₁₄O₃₃₀S₁₅,為不穩(wěn)定蛋白、無(wú)跨膜區(qū)、無(wú)信號(hào)肽,是一種含較多抗原表位的親水性蛋白,有7個(gè)B細(xì)胞抗原表位和11個(gè)T細(xì)胞抗原表位,有望用作捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥性的診斷抗原。本研究獲得了P450重組蛋白,為捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥性快速檢測(cè)方法和新藥開(kāi)發(fā)奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。

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分析在機(jī)體的免疫應(yīng)圖3P450蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.3TertiarystructurepredictionofP450protein22.3.4PP450蛋白抗原表位的

預(yù)測(cè)非典型分泌蛋白發(fā)現(xiàn)，P450蛋白NN-Score=0.800（若NN-Score>0.5，判定為分泌蛋白），所以該蛋白屬于分泌蛋白。結(jié)果表明，該蛋白不含有跨膜區(qū)和信號(hào)肽，屬于膜外分泌蛋白，推測(cè)該蛋白可能在細(xì)胞合成后直接被分泌從而發(fā)揮生物學(xué)作用。22.3.3PP450蛋白的三級(jí)....

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