羊傳染性膿皰(contagious ecthyma)俗稱“羊口瘡”,是由痘病毒科,副痘病毒屬羊口瘡病毒(orf virus, ORFV)引起的一種急性、高度接觸性人獸共患傳染病。該病主要侵害綿羊和山羊。臨床上患病動物以口唇周圍和乳房部位皮膚形成丘疹、水皰、膿皰和疣狀痂皮為特征。該病發(fā)病率高,病死率低。羊傳染性膿皰的暴發(fā)和流行不但嚴(yán)重危害肉羊產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展,而且威脅人們的身體健康。 隨著基因組測序技術(shù)的發(fā)展,多株羊口瘡病毒的全基因組序列被測定,這為羊口瘡病毒致病的分子機制研究提供了參考,但是基因組學(xué)技術(shù)研究只針對病原體自身,而不能反映病原體與宿主間的相互作用。目前利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對ORFV和宿主細(xì)胞相互作用的研究未見相關(guān)報道。本研究以O(shè)RFV和山羊皮膚成纖維細(xì)胞(goat skin fibroblasts, GSFs)為研究對象,應(yīng)用同位素標(biāo)記相對和絕對定量聯(lián)合二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry coupled with isobaric tags for relativ...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(ABBREVIATION)
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 羊傳染性膿皰研究進(jìn)展
        1.1.1 病原學(xué)與基因組
        1.1.2 流行病學(xué)
        1.1.3 抗病毒免疫和免疫逃避
        1.1.4 羊口瘡診斷方法
        1.1.5 羊口瘡疫苗及疫苗載體
        1.1.6 防治
    1.2 同位素標(biāo)記相對和絕對定量蛋白組技術(shù)研究進(jìn)展
        1.2.1 定量蛋白組學(xué)的發(fā)展
        1.2.2 iTRAQ^TM試劑結(jié)構(gòu)
        1.2.3 iTRAQ^TM基本實驗流程
        1.2.4 iTRAQ^TM實驗設(shè)備和定量的準(zhǔn)確性
        1.2.5 iTRAQ^TM分析結(jié)果的校驗
        1.2.6 iTRAQ^TM揭示病毒致病機制
        1.2.7 iTRAQ^TM在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 毒株、菌株、實驗動物和細(xì)胞
        3.1.2 載體、抗體、酶類試劑
        3.1.3 主要溶液的配制
        3.1.4 主要儀器及設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 本研究使用的分子生物學(xué)基本操作方法
        3.2.2 羊口瘡病毒B2L蛋白單克隆抗體制備
        3.2.3 羊口瘡病毒在GSFs上的增殖特性研究
        3.2.4 羊口瘡病毒ORF125蛋白的亞細(xì)胞定位
        3.2.5 羊口瘡病毒感染致宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)組變化及功能分析
        3.2.6 HSPA1B對ORFV在GSFs細(xì)胞增殖的影響
4 結(jié)果與分析
    4.1 ORFV B2L蛋白單克隆抗體制備結(jié)果
        4.1.1 B2L蛋白的原核表達(dá)
        4.1.2 雜交瘤細(xì)胞篩選及腹水效價
        4.1.3 單克隆抗體特異性鑒定
    4.2 ORFV在GSFs的增殖特性研究結(jié)果
        4.2.1 ORFV首次感染GSFs的增殖動力學(xué)
        4.2.2 ORFV在GSFs的適應(yīng)性研究及一步法生長曲線測定結(jié)果
    4.3 ORF125蛋白的結(jié)構(gòu)預(yù)測及亞細(xì)胞定位結(jié)果
        4.3.1 pEFGP-ORF125重組質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定
        4.3.2 ORF125基因結(jié)構(gòu)預(yù)測及比對分析
        4.3.3 ORF125的亞細(xì)胞定位觀察
    4.4 ORFV感染致宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)組變化及功能分析
        4.4.1 差異蛋白質(zhì)鑒定及相對定量
        4.4.2 差異表達(dá)蛋白的功能分類
        4.4.3 差異表達(dá)蛋白的Real-time PCR驗證
        4.4.4 差異表達(dá)蛋白的western-blot驗證
        4.4.5 差異表達(dá)蛋白的Pathway分析
    4.5 HSPA1B對ORFV在GSFs細(xì)胞增殖的影響結(jié)果
        4.5.1 pEFGP-HSPA1B重組載體的構(gòu)建及鑒定
        4.5.2 HSPA1B的亞細(xì)胞定位觀察
        4.5.3 HSPA1B對ORFV在GSFs增殖的影響
5 討論
    5.1 羊口瘡病毒B2L蛋白單克隆抗體的制備
    5.2 羊口瘡病毒在GSFs的增殖特性研究
    5.3 羊口瘡病毒感染致宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)組變化及功能分析
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附表
附錄
致謝



本文編號：3907112