猴B病毒(Monkey B virus,即Macacine alphaherpesvirus 1),是一種人畜共患病病原,其在自然宿主獼猴中多呈良性經(jīng)過,而感染人后可引起腦脊髓炎甚至死亡,是目前確定的35種非人靈長類皰疹病毒中唯一一種已知對人有致病性的病毒,也是我國實驗動物微生物學等級及監(jiān)測國家標準中普通級實驗用猴應排除的病原微生物。而目前現(xiàn)有的猴B病毒檢測方法存在與人單純皰疹病毒有交叉反應、步驟繁瑣或無法同時檢測猴B病毒所有基因型的問題,因此,亟需建立快速、特異、通用檢測猴B病毒的方法,對于相關人員暴露后的快速診斷和治療以及對建立高質(zhì)量的實驗猴群均具有重要意義。目的:建立能同時檢測猴B病毒5種基因型的通用實時熒光定量PCR檢測體系,并對其進行方法學評價。方法:首先,通過文獻調(diào)研,確定猴B病毒的gB基因相對保守,從GenBank上下載猴B病毒5種基因型代表株的gB基因序列,使用DNAStar軟件對這5種基因型代表毒株進行比對,確定猴B病毒各基因型gB基因的相對保守位置,再將這些保守位置序列與人單純皰疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)、人單純...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1猴B病毒活化后48小時的超微結構.×54,000（RuebnerBH,etal.,1975）

引起人口腔潰瘍的HSV-1和人生殖器皰疹的HS恒河猴中不表現(xiàn)疾病癥狀，Sabin等命名該病毒為病毒分類委員會（TheInternationalCommi據(jù)病毒的特征以及其與單純皰疹病毒的交叉反應型（Cercopithecineherpesvirus1）[14]，2....

圖1-3系統(tǒng)發(fā)育分析猴B病毒UL19和UL27（gB）蛋白核苷酸序列結果

圖1-3系統(tǒng)發(fā)育分析猴B病毒UL19和UL27（gB）蛋白核苷酸序列結果Fig.1-3PhylogeneticAnalysisofMonkeyBVirusUL19andUL27(gB)ProteinNucleotideSequences注：先....

圖2-1引物3F和3R進行PCR擴增產(chǎn)物Fig.2-1ThePCRamplificationofprimer3Fand3R

2-1引物3F和3R進行PCR擴增產(chǎn)-1ThePCRamplificationofprimer3FMarker；a~b：引物3F和3R擴增產(chǎn)r；a-b：Amplificationproductsofpri圖2-2菌落PCR篩選重組質(zhì)粒r....

圖2-2菌落PCR篩選重組質(zhì)粒Fig.2-2therecombinantplasmidverifiedbyPCRamplificationM：DL500DNAMarker；al：菌落PCR擴增片段；m：陰性對照

見圖2-2，擴大培養(yǎng)正確的陽性克隆并提取質(zhì)粒得到重組質(zhì)粒插入片段的序列后，使用DNAStar軟件與目全匹配，確定獲得了準確的猴B病毒gB3重組質(zhì)粒，見圖重組gB3號參考品質(zhì)粒。圖2-1引物3F和3R進行PCR擴增產(chǎn)物Fig.2-1ThePCRa....

本文編號：3906515