發(fā)布時間：2024-02-19 16:32

　　為克隆豬德爾塔冠狀病毒N基因并進行序列分析及原核表達,參考GenBank上登錄的PDCoV(HKU15-44)N基因序列,合成1對(PDCoV)游引物,PCR擴增N基因,并進行序列分析和原核表達。結(jié)果表明,成功克隆了1 026 bp的N基因,核苷酸序列分析表明,PDCoV N基因與國內(nèi)分離株核苷酸同源性最高為98.76%,氨基酸分析表明N蛋白不含信號肽和跨膜區(qū)。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后成功表達了分子質(zhì)量約47 ku的N蛋白,該蛋白能與PDCoV陽性血清結(jié)合,具備良好的抗原性。研究結(jié)果為進一步建立PDCoV快速檢測方法和研究PDCoV亞單位疫苗奠定了基礎(chǔ)。

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圖1PDCoV陜西株N基因PCR擴增

Westernblot結(jié)果分析,N蛋白能與PDCov陽性血清特異性結(jié)合,而陰性對照空載體沒有出現(xiàn)特異性條帶(圖6)。圖2重組質(zhì)粒pET-28a-N的雙酶切鑒定

圖2重組質(zhì)粒pET-28a-N的雙酶切鑒定

圖1PDCoV陜西株N基因PCR擴增圖3N蛋白的生物信息學分析

圖3N蛋白的生物信息學分析

圖2重組質(zhì)粒pET-28a-N的雙酶切鑒定圖4N核苷酸序列系統(tǒng)進化樹

圖4N核苷酸序列系統(tǒng)進化樹

圖3N蛋白的生物信息學分析圖5N重組蛋白的SDSPAGE分析

本文編號：3902997