乳腺作為一種與哺乳動(dòng)物繁殖周期密切相關(guān)的重要第二性征器官,其發(fā)育和泌乳受多重因素的調(diào)控,其中乳腺特異性轉(zhuǎn)錄因子STAT5a在調(diào)控乳腺發(fā)育及泌乳過程中有重要作用。有研究表明,催化組蛋白3第9位賴氨酸三甲基化(H3K9me3)的特異性組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶SUV39H1/2與染色質(zhì)濃縮和基因表達(dá)調(diào)控等密切相關(guān)。為了解SUV39H1/2基因在乳腺發(fā)育和泌乳過程中的作用,本研究擬采用RNA干擾技術(shù)探討SUV39H1/2基因表達(dá)下調(diào)對(duì)水牛乳腺上皮細(xì)胞增殖、乳腺發(fā)育及STAT5a等泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響,以闡明H3K9me3在調(diào)控水牛乳腺發(fā)育及泌乳方面的作用。研究取得如下結(jié)果。1.5UV39H1/2對(duì)水牛乳腺上皮細(xì)胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響首先利用293T細(xì)胞包裝獲得SUV39H1/2-shRNA慢病毒,通過慢病毒感染水牛乳腺上皮細(xì)胞,觀察其對(duì)細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與未感染組相比,SUV39H1/2基因表達(dá)下調(diào)可以促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞的增殖;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期時(shí)發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期阻滯在S期,G0/G1期細(xì)胞比例無顯著差異,G2期比例顯著減少(P<0.05)。qRT-PCR結(jié)果顯示,5...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ載體骨架??Ｆｉｇ２－１?Ｖｅｃｔｏｒ?Ｂａｃｋｂｏｎｅ?ｏｆ?ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ??２－１?ＳＣ／Ｆ３９／／／／２ｓｈＲＮＡ

菌株：大腸桿菌Ｅ．ｃｏｌｉ?ＤＨ５廣購自全式金生物科技有限公司。??質(zhì)粒：基因表達(dá)的載體及基因克隆載體購自ＴａＫａＲａ公司。ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ的慢??病毒表達(dá)載體骨架圖譜見（圖２－１），廣西本地水�！觯樱茫疲常梗罚不虻模螅瑁遥危�??序列采用林浪，代小麗等人發(fā)表的文章［５....

圖２－２質(zhì)粒轉(zhuǎn)染２９３Ｔ細(xì)胞熒光檢測(cè)結(jié)果（４８ｈ?１００ｘ）??Ｆｉｇ．２－２?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋｉｎｇ?ｕｎｄｅｒ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（４８ｈ）??

８０００ｂｐ?＾？＾一??圖２－１病毒包裝質(zhì)粒酶切鑒定??Ｆｉｇ．?３－１?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒｓ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋｉｎｇ??Ｍｌ?：Ｓｕｐｅｒｃｏｉｌｅｄ?ｍａｒｋｅｒ?Ｍ２：?ｍａｒｋｅｒ?....

圖２－３?２９３Ｔ細(xì)胞病毒滴度測(cè)定（４８ｈ?１０〇ｘ）??Ｆｉｇ．２－３?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?Ｖｉｒａｌ?ｔｉｔｅｒ?ａｓｓａｙ?ｆｏｒ?２９３Ｔ?ｃｅｌｌ?（４８ｈ?１０〇ｘ）??

并且熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。ＭＯＩ值為８００和１０００時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)未受到影響，??當(dāng)ＭＯＩ值為１４００時(shí)，水牛乳腺上細(xì)胞空腔增多，培養(yǎng)基中死細(xì)胞數(shù)增多。因此??采用ＭＯＩ值為１０００的病毒濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)（圖２－４）。??＿關(guān)??圖２－４不同ＭＯＩ值病毒感染水牛乳腺上皮細(xì)胞??Ｆｉｇ．....

圖３－２?啟動(dòng)子ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＳＴＡＴ５ａ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??－

序列對(duì)比顯示：克隆獲得水牛啟動(dòng)子區(qū)域，與ＵＣＳＣ數(shù)據(jù)庫中的??基因上游２０００?ＢＰ啟動(dòng)子區(qū)序列同源性達(dá)９９％。??■??圖３－２?啟動(dòng)子ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＳＴＡＴ５ａ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋ....

本文編號(hào)：3900995