大豆中的抗原蛋白能引起機(jī)體發(fā)生過(guò)敏反應(yīng),不僅威脅人類的健康,也給畜禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)通過(guò)高純度的大豆抗原蛋白致敏仔豬,研究大豆抗原蛋白對(duì)仔豬腸道的致敏作用,同時(shí)建立一種仔豬大豆抗原蛋白血清抗體間接酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)的檢測(cè)方法,以期為動(dòng)物大豆抗原蛋白致敏提供臨床診斷方法。大豆抗原蛋白對(duì)仔豬腸道的致敏作用。試驗(yàn)采取完全隨機(jī)設(shè)計(jì),將30頭臨床檢查健康的21日齡斷奶仔豬隨機(jī)分為3個(gè)組,每組10頭,分別為對(duì)照組、大豆球蛋白(11S)致敏組和β-伴大豆球蛋白(7S)致敏組。在仔豬21-27日齡與32-34日齡時(shí),分別進(jìn)行初次致敏和再次致敏。其中,11S和7S致敏組,在基礎(chǔ)日糧中分別添加4%的11S蛋白和4%的7S蛋白(純度分別為80%和85%)。在仔豬21、28和35日齡時(shí),用EDTA抗凝管進(jìn)行前腔靜脈采血,用于ELISA試劑盒測(cè)定血漿D-乳酸、二胺氧化酶和5-羥色胺含量水平;在仔豬35日齡時(shí),進(jìn)行皮膚致敏試驗(yàn)；在36日齡時(shí),每組隨機(jī)選擇5頭仔豬屠宰,取十二指腸近端、空腸近端、空腸中段、空腸遠(yuǎn)端、回腸遠(yuǎn)端各6 cm,用免疫組化方法測(cè)定分泌型IgA陽(yáng)性表達(dá)分布及強(qiáng)弱。仔豬大豆...

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文縮寫(xiě)詞
文獻(xiàn)綜述
引言
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 試劑和儀器
        1.2.1 大豆抗原蛋白對(duì)仔豬腸道致敏作用試驗(yàn)
        1.2.2 大豆抗原蛋白血清抗體間接ELISA檢測(cè)方法試驗(yàn)
    1.3 試驗(yàn)分組及方法
    1.4 試驗(yàn)仔豬飼養(yǎng)管理
    1.5 仔豬樣品的采集與處理
        1.5.1 仔豬血清的采集與處理
        1.5.2 仔豬血漿的采集與處理
        1.5.3 仔豬腸管的采集與處理
    1.6 大豆抗原蛋白的皮膚致敏試驗(yàn)
    1.7 檢測(cè)指標(biāo)及方法
        1.7.1 血漿D-乳酸、二胺氧化酶、5-羥色胺含量水平
        1.7.2 腸道sIgA采用免疫組化PV6000法
    1.8 11S和7S抗原蛋白血清抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立
        1.8.1 11S和7S抗原包被最佳濃度和酶標(biāo)抗體稀釋最佳濃度的確定
        1.8.2 抗血清的稀釋倍數(shù)及加樣方法
        1.8.3 最佳試驗(yàn)反應(yīng)條件的標(biāo)準(zhǔn)及其篩選
        1.8.4 11S蛋白和7S蛋白抗血清的交叉反應(yīng)
        1.8.5 重復(fù)性試驗(yàn)
        1.8.6 待檢測(cè)結(jié)果的判定方法
        1.8.7 間接ELISA法檢測(cè)大豆抗原蛋白抗體方法的應(yīng)用
    1.9 數(shù)據(jù)處理
        1.9.1 試驗(yàn)血清指標(biāo)的結(jié)果處理
        1.9.2 組織學(xué)圖片處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 大豆抗原蛋白皮膚致敏試驗(yàn)
    2.2 血漿中D-乳酸、二胺氧化酶、5-羥色胺含量水平
        2.2.1 血漿中D-乳酸含量水平
        2.2.2 血漿中二胺氧化酶活力
        2.2.3 血漿中5-羥色胺含量水平
    2.3 腸道分泌型IgA免疫組化陽(yáng)性表達(dá)
        2.3.1 分泌型IgA免疫組化圖片
        2.3.2 分泌型IgA免疫組化陽(yáng)性表達(dá)光密度值
    2.4 大豆抗原蛋白間接ELISA檢測(cè)條件的優(yōu)化
        2.4.1 11S和7S抗原蛋白間接ELISA酶標(biāo)抗體的最適稀釋倍數(shù)的確定
        2.4.2 11S和7S抗原包被最佳濃度和陽(yáng)性血清最佳稀釋倍數(shù)的確定
        2.4.3 ELISA最佳反應(yīng)條件確定
        2.4.4 交叉性試驗(yàn)
        2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn)
        2.4.6 檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)
        2.4.7 間接ELISA法檢測(cè)大豆抗原蛋白抗體臨床應(yīng)用的準(zhǔn)確性
3 討論
    3.1 大豆抗原蛋白對(duì)皮膚致敏反應(yīng)
    3.2 大豆抗原蛋白對(duì)腸道通透性的影響
    3.3 大豆抗原蛋白對(duì)體內(nèi)5-羥色胺含量水平的影響
    3.4 大豆抗原蛋白對(duì)分泌型IgA的影響
    3.5 大豆抗原蛋白血清抗體間接ELISA方法的建立
    3.6 存在的問(wèn)題
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3894982