為了建立一種特異、敏感、快速檢測羊泰勒蟲方法,以羊泰勒蟲主要表面蛋白(MPSP)基因設(shè)計引物,建立羊泰勒蟲套式PCR檢測方法。結(jié)果表明,該方法只能擴(kuò)增出羊泰勒蟲,而對照組羊巴貝斯蟲、羊無漿體和弓形蟲基因組DNA均未擴(kuò)出目的條帶。該方法敏感性是普通PCR的1 000倍,其最低檢測到1拷貝數(shù)的MPSP基因。對采自吉林琿春地區(qū)30份羊血液樣本檢測發(fā)現(xiàn),套式PCR陽性率為46.6%(14/30),高于普通PCR(40.00%,12/30)和血液涂片染色(23.33%,7/30),三者陽性符合率為100%。結(jié)果表明,所建立的套式PCR可用于羊泰勒蟲病的診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

圖5套式PCR敏感性

圖4普通PCR敏感性2.6臨床樣本檢測

圖1血液涂片吉姆薩染色鏡檢結(jié)果(1000×)

綿羊血涂片染色后,在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)梨籽形和點狀羊泰勒蟲蟲體,見圖1。2.2PCR擴(kuò)增

圖2套式PCR擴(kuò)增結(jié)果

DNA經(jīng)外引物PCR擴(kuò)出約為852bp目的條帶,退火溫度為55℃;經(jīng)內(nèi)引物PCR擴(kuò)出約為492bp目的條帶,最佳退火溫度為58℃(見圖2)。2.3目的基因序列測定

圖3特異性PCR擴(kuò)增

該方法可特異性檢測出羊泰勒蟲基因組DNA,而以羊巴貝斯蟲、弓形蟲和綿羊無漿體的DNA為模板時未能擴(kuò)增出相應(yīng)基因片斷(圖3),具有較好的特異性。2.5敏感性試驗

本文編號：3892090