硬脂酰輔酶A脫氫酶-1(stearosyl coenzyme A dehydrogenase-1,SCD-1)是調(diào)控肝細(xì)胞合成單不飽和脂肪酸的限速酶,對畜禽機(jī)體脂肪沉積有重要影響。Ca²⁺是機(jī)體不可或缺的重要離子,對機(jī)體各項生理功能具有重要調(diào)控作用,也是參與家禽蛋殼形成過程中最主要的成份,直接影響蛋殼質(zhì)量。前人的研究結(jié)果表明,Ca²⁺濃度的變化能影響脂質(zhì)的合成代謝。但有關(guān)畜禽Ca²⁺、脂質(zhì)和調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的相互關(guān)系缺乏報道。因此,闡明家禽子宮上皮細(xì)胞中鈣、脂質(zhì)和SCD-1基因過表達(dá)之間的相關(guān)性,探討家禽SCD-1基因影響子宮上皮細(xì)胞Ca²⁺分泌的調(diào)控作用,對提升家禽蛋殼品質(zhì)有重要意義。為此,本研究開展鴨SCD-1基因?qū)ψ訉m上皮細(xì)胞Ca²⁺的調(diào)控效應(yīng)及其啟動子活性研究,取得如下結(jié)果:1.根據(jù)GenBank登錄號(NW₀04677643.1)中SCD-1基因序列設(shè)計引物,擴(kuò)增SCD-1基因啟動子并直接測序,啟動子軟件分析結(jié)果顯示:SCD-1基因啟動子(位...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 SCD-1 基因概述
        1.1.1 SCD-1 基因的分子結(jié)構(gòu)及其作用機(jī)理
        1.1.2 SCD-1 基因與代謝疾病
        1.1.3 SCD-1 基因與病毒性疾病
        1.1.4 SCD-1 基因?qū)χ|(zhì)代謝的調(diào)控作用
        1.1.5 SCD-1 啟動子研究進(jìn)展
    1.2 蛋殼主要成分及Ca²⁺的代謝調(diào)控
        1.2.1 蛋殼的主要成分
        1.2.2 Ca²⁺在子宮內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
        1.2.3 蛋殼形成機(jī)制
    1.3 Ca²⁺與脂質(zhì)代謝關(guān)系研究進(jìn)展
        1.3.1 Ca²⁺與脂質(zhì)代謝的關(guān)系
        1.3.2 Ca²⁺與基因調(diào)控
        1.3.3 脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的調(diào)控
    1.4 研究目的與意義
第二章 SCD-1 基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗樣品
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 試驗儀器
        2.1.4 配制試劑
        2.1.5 基因組DNA提取
        2.1.6 PCR擴(kuò)增及真核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.1.7 細(xì)胞培養(yǎng)及啟動子活性檢測
        2.1.8 PUFA對啟動子的效應(yīng)
        2.1.9 SCD-1 基因啟動子結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.1.10 統(tǒng)計分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 鴨SCD-1 基因啟動子生物信息學(xué)分析
        2.2.2 SCD-1 基因啟動子真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 pEGFP-C1 轉(zhuǎn)染PC3 細(xì)胞檢測轉(zhuǎn)染效率
        2.2.4 SCD-1 基因啟動子活性檢測
        2.2.5 PUFA對 SCD-1 基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控
    2.3 討論
第三章 鴨子宮上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗動物
        3.1.2 試驗試劑
        3.1.3 試驗儀器
        3.1.4 試劑配制
        3.1.5 分離子宮上皮細(xì)胞
        3.1.6 子宮上皮細(xì)胞間接免疫熒光鑒定
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 子宮上皮細(xì)胞的初分離與活性鑒定
        3.2.2 鴨子宮上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及鑒定
        3.2.3 鴨子宮上皮細(xì)胞間接免疫熒光鑒定
    3.3 討論
第四章 SCD-1 基因過表達(dá)對鴨子宮上皮細(xì)胞鈣離子和脂質(zhì)的調(diào)控研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗動物
        4.1.2 購買的試驗試劑
        4.1.3 試驗儀器
        4.1.4 試劑配制
        4.1.5 鴨總RNA提取與c DNA合成
        4.1.6 擴(kuò)增SCD-1 基因CDS區(qū)
        4.1.7 PCR擴(kuò)增及pcDNA3.1(+)+SCD-1+Flag真核表達(dá)載體構(gòu)建
        4.1.8 pcDNA3.1(+)-SCD-1-Flag真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染子宮上皮細(xì)胞
        4.1.9 Fluo-3/AM熒光標(biāo)記法測定子宮上皮細(xì)胞內(nèi)鈣Ca²⁺濃度
        4.1.10 鴨子宮上皮細(xì)胞脂質(zhì)性狀和鴨Flag標(biāo)簽表達(dá)量的測定
        4.1.11 統(tǒng)計方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 SCD-1 基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.2 Fluo-3/AM熒光標(biāo)記法對鴨子宮上皮細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺染色效果
        4.2.3 pcDNA3.1(+)+SCD-1+Flag和 pEGFP-C1 共轉(zhuǎn)染鴨子宮上皮細(xì)胞
        4.2.4 鴨SCD-1 基因過表達(dá)與子宮上皮細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺及脂質(zhì)指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性分析
    4.3 討論
第五章 小結(jié)
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 下一步工作
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
    附錄 Ⅰ 碩士研究生在讀期間參與項目
    附錄 Ⅱ 碩士研究生在讀期間發(fā)表的論文
    附錄 Ⅲ 碩士研究生在讀期間獲得的獎項



本文編號：3889331