CD300a分子是CD300分子超家族中的一個(gè)重要成員,是白細(xì)胞的表面抗原之一,在調(diào)節(jié)不同的免疫細(xì)胞過(guò)程中起著重要的作用。CD300a廣泛表達(dá)于髓系細(xì)胞及淋巴系細(xì)胞,且表達(dá)的差異性取決于細(xì)胞的類(lèi)型,并參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程,同時(shí)與過(guò)敏性疾病、感染性疾病、慢性炎癥等疾病關(guān)系緊密。本研究根據(jù)GenBank中的牛源CD300a基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物,應(yīng)用牛單核巨噬細(xì)胞cDNA作為模版,擴(kuò)增CD300a基因片段,建立檢測(cè)該基因的SYBR Green I熒光定量PCR方法,并做出熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再設(shè)計(jì)另外一對(duì)帶有酶切位點(diǎn)引物,擴(kuò)增CD300a全基因,構(gòu)建CD300a全基因的真核表達(dá)載體,并在HEK-293T細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。結(jié)果表明,本研究成功建立了牛CD300a基因SYBR Green I熒光定量PCR檢測(cè)方法,靈敏性達(dá)10拷貝/μL;定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的擴(kuò)增效率E=90.0%,相關(guān)系數(shù)R²=0.999,表明此方法可用于檢測(cè)牛CD300a在細(xì)胞中的表達(dá)。對(duì)牛CD300a全基因的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn),其基因全長(zhǎng)為900bp,含一個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域,在氨基酸序列第182-20...

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

圖1牛CD300a普通PCR電泳圖

圖2pGEM-CD300aPCR電泳圖

圖3pGEM-CD300a酶切電泳圖

圖4pGEM-CD300aBLASTn比對(duì)結(jié)果

本文編號(hào)：3887226