CD300a分子是CD300分子超家族中的一個重要成員,是白細胞的表面抗原之一,在調(diào)節(jié)不同的免疫細胞過程中起著重要的作用。CD300a廣泛表達于髓系細胞及淋巴系細胞,且表達的差異性取決于細胞的類型,并參與調(diào)節(jié)細胞的生長過程,同時與過敏性疾病、感染性疾病、慢性炎癥等疾病關(guān)系緊密。本研究根據(jù)GenBank中的牛源CD300a基因序列設(shè)計一對特異性引物,應用牛單核巨噬細胞cDNA作為模版,擴增CD300a基因片段,建立檢測該基因的SYBR Green I熒光定量PCR方法,并做出熒光定量PCR的標準曲線。再設(shè)計另外一對帶有酶切位點引物,擴增CD300a全基因,構(gòu)建CD300a全基因的真核表達載體,并在HEK-293T細胞進行轉(zhuǎn)染。結(jié)果表明,本研究成功建立了牛CD300a基因SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法,靈敏性達10拷貝/μL;定量PCR標準曲線的擴增效率E=90.0%,相關(guān)系數(shù)R²=0.999,表明此方法可用于檢測牛CD300a在細胞中的表達。對牛CD300a全基因的克隆測序發(fā)現(xiàn),其基因全長為900bp,含一個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域,在氨基酸序列第182-20...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

圖1牛CD300a普通PCR電泳圖

圖2pGEM-CD300aPCR電泳圖

圖3pGEM-CD300a酶切電泳圖

圖4pGEM-CD300aBLASTn比對結(jié)果

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