甲型流感病毒(Influenza A viruses)屬于正粘病毒科,其基因組是由8個分節(jié)段的單股負義RNA鏈組成的。歷史上暴發(fā)過多次甲型流感病毒引起的全球流感大流行,造成大規(guī)模人群感染死亡：每年呈季節(jié)性流行的H1N1和H3N2甲型流感病毒可造成全球25-50萬人感染死亡；近年來不斷涌現(xiàn)的各種人感染禽流感病毒死亡事件也均是由甲型流感病毒引發(fā)的,因此,系統(tǒng)研究甲型流感病毒有助于加強人類對該病毒防控能力。甲型流感病毒核蛋白(Nucleoprotein, NP)高度保守,是流感病毒診斷與分型的重要靶標；近年來研究發(fā)現(xiàn)NP在病毒的復(fù)制和增殖過程中起重要作用,使NP逐漸成為一個重要的抗流感病毒治療靶標,因此,研究甲型流感NP蛋白對該病毒的診斷和抗病毒治療均具有重要意義。表位研究對于病毒的診斷和抗病毒治療均具有重要指導(dǎo)意義,但迄今NP中的B細胞表位仍罕見報道,可能與NP作為一個多聚體蛋白而構(gòu)象復(fù)雜有關(guān)。本課題組前期在開發(fā)甲型流感病毒診斷試劑中曾積累了一批NP特異性單抗,本研究擬在此基礎(chǔ)上,進一步對這些NP單抗進行表位鑒定,發(fā)現(xiàn)潛在的保守性B細胞表位,并研究表位的相關(guān)功能,以期對流感病毒的預(yù)防和治療...

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 流感病毒概述
        1.1.1 流感病毒的分類及命名
        1.1.2 流感病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)及組成
        1.1.3 甲型流感病毒基因組編碼蛋白的結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.4 甲型流感病毒的生活史
    1.2 甲型流感病毒的流行病學(xué)
        1.2.1 流感病毒的流行狀況
        1.2.2 病毒的變異及進化
    1.3 流感病毒的預(yù)防、治療及診斷手段
        1.3.1 流感病毒的預(yù)防及治療性藥物
        1.3.2 流感病毒的傳統(tǒng)診斷法
        1.3.3 流感病毒的分子診斷法
        1.3.4 流感病毒的快速診斷法
    1.4 流感病毒的NP表位研究現(xiàn)狀
        1.4.1 NP的表位研究現(xiàn)狀
        1.4.2 保守表位的鑒定方法學(xué)
    1.5 本論文的研究意義及主要研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 主要儀器
    2.2 主要耗材
    2.3 主要試劑與實驗動物
    2.4 常用溶液和培養(yǎng)基的配制
    2.5 實驗方法
        2.5.1 分子克隆及蛋白表達相關(guān)操作
        2.5.2 流感病毒的滴度測定
        2.5.3 流感病毒基因的獲得和序列分析
        2.5.4 小鼠的免疫
        2.5.5 融合雜交瘤的制備與篩選
        2.5.6 雜交瘤細胞的培養(yǎng)
        2.5.7 單抗腹水的誘導(dǎo)
        2.5.8 單抗腹水的純化
        2.5.9 血凝抑制試驗(Hemagglutination Inhibition Assay,HI)
        2.5.10 酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)
        2.5.11 免疫滲濾法(Dot-ELISA)
        2.5.12 細胞免疫熒光實驗
        2.5.13 NP單抗V區(qū)編碼序列的測定
        2.5.14 分子模擬與對接
        2.5.15 重組蛋白的透射電鏡觀察
        2.5.16 分析型超速離心（沉降速度實驗）
        2.5.17 流感病毒對小鼠的感染和組織采集
        2.5.18 HE染色分析
        2.5.19 免疫組化分析
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 甲型流感病毒核蛋白單抗的分類
        3.1.1 甲型流感病毒進化分析及代表株的選擇
        3.1.2 重組NP抗原的制備及性質(zhì)鑒定
        3.1.3 甲型流感病毒核蛋白單抗庫的分類
    3.2 NP保守線性表位的發(fā)現(xiàn)及應(yīng)用
    3.3 NP保守性構(gòu)象表位關(guān)鍵性氨基酸的發(fā)現(xiàn)及功能性研究
    3.4 人、禽宿主NP抗原性差異的關(guān)鍵位點的發(fā)現(xiàn)及應(yīng)用
第四章 討論
    4.1 甲型流感病毒NP的進化分析及表位鑒定
    4.2 NP的聚體形式分析
    4.3 人禽宿主差異診斷試劑的開發(fā)
    4.4 NP保守性表位鑒定、分析及應(yīng)用
結(jié)論與展望
參考文獻
致謝



本文編號：3883985