防御素(defensins)是動物體內(nèi)先天性免疫系統(tǒng)的主要成員之一,具有廣譜的抗微生物活性,廣泛表達在動物組織細胞中,它的表達受到多種因素的影響,其中益生菌是影響因素之一。本試驗選用益生植物乳桿菌研究對體外培養(yǎng)的綿羊瘤胃上皮細胞內(nèi)防御素表達的影響。首先建立穩(wěn)定的綿羊瘤胃上皮細胞培養(yǎng)體系,在無菌條件下獲取傳一代綿羊瘤胃上皮細胞,并通過形態(tài)學、繪制生長曲線和免疫組化方法對其進行鑒定,然后將活化并純化好的植物乳桿菌和體外培養(yǎng)的傳一代綿羊瘤胃上皮細胞進行共培養(yǎng),通過不同的菌液濃度和不同的刺激時間,利用熒光定量PCR技術研究接受刺激后瘤胃上皮細胞中綿羊β-防御素-1(Sheep Beta-Defensin-1,SBD-1)基因表達水平的差異。結果表明：通過鑒定,證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的上皮細胞特征,并且生長狀態(tài)良好,適合作為下一步研究的試驗模型。通過植物乳桿菌和瘤胃上皮細胞共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn),當菌液濃度為109cfu/ml刺激上皮細胞8h后,SBD-1的表達量達到最高水平,當菌液濃度為108、107和106cfu/ml時的表達量與空白對照基本持平。通過比較當菌液濃度為1010和109cfu/ml刺激...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 防御素的研究進展
        1.1.1 防御素的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 防御素的分類及分布
        1.1.3 β-防御素的結構和表達調(diào)控
        1.1.4 β-防御素的作用
    1.2 綿羊瘤胃上皮結構及上皮細胞培養(yǎng)
        1.2.1 綿羊瘤胃上皮結構
        1.2.2 瘤胃上皮細胞培養(yǎng)
    1.3 益生菌
        1.3.1 益生菌的定義
        1.3.2 益生菌的分布及分類
        1.3.3 益生菌的生理功能
        1.3.4 植物乳桿菌的生物學特性和生理功能
    1.4 試驗的目的和意義
2 試驗部分
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 儀器設備
        2.1.3 試驗藥品
    2.2 試驗方法
        2.2.1 綿羊瘤胃上皮細胞培養(yǎng)及鑒定
        2.2.2 綿羊瘤胃上皮細胞的特征鑒定
        2.2.3 植物乳桿菌的培養(yǎng)
        2.2.4 植物乳桿菌對綿羊上皮細胞β-防御素(SBD-1)基因表達的影
3 試驗結果
    3.1 綿羊瘤胃上皮細胞培養(yǎng)
        3.1.1 綿羊瘤胃上皮細胞原代培養(yǎng)
        3.1.2 綿羊瘤胃上皮細胞傳代培養(yǎng)
        3.1.3 綿羊瘤胃上皮細胞的凍存與復蘇
    3.2 綿羊上皮細胞的特征鑒定
        3.2.1 光學顯微鏡檢查
        3.2.2 瘤胃上皮傳代細胞的生長曲線
        3.2.3 免疫組化檢測
    3.3 植物乳桿菌的培養(yǎng)
    3.4 植物乳桿菌對綿羊上皮細胞β-防御素(SBD-1)基因表達的影響
        3.4.1 瘤胃上皮細胞總RNA的檢測結果
        3.4.2 熒光定量PCR檢測瘤胃上皮細胞SBD-1和β-actin基因mRNA的表達
4 討論
    4.1 綿羊瘤胃上皮細胞的培養(yǎng)
        4.1.1 綿羊瘤胃上皮細胞的原代及傳代培養(yǎng)
        4.1.2 綿羊瘤胃上皮細胞的鑒定
    4.2 植物乳桿菌的培養(yǎng)
    4.3 植物乳桿菌對SBD-1基因表達的影響
5 結論
致謝
參考文獻
作者簡介



本文編號：3881165