仔豬腹瀉是生豬養(yǎng)殖常見的腸道性疾病之一,發(fā)病時易造成仔豬免疫機能下降、生長變緩、飼料利用率降低、死亡率上升等。據(jù)統(tǒng)計,每年仔豬腹瀉死亡占總死亡數(shù)的半數(shù)之多,造成巨大的經(jīng)濟損失,嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。根據(jù)仔豬腹瀉的病因,可分為生理性腹瀉、營養(yǎng)性腹瀉、應激性腹瀉、自身性腹瀉以及疾病性腹瀉。疾病性腹瀉包括病毒性腹瀉、寄生蟲性腹瀉以及細菌性腹瀉等。其中C型產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens type C,C.perfringens)是引發(fā)仔豬細菌性腹瀉的因素之一,主要集中在7日齡以內仔豬,發(fā)病率(60⁸0%)和死亡率(80¹00%)極高。雖然該疾病在分子流行性病學的調查、診斷、預防及治療方面取得一定的進展。但有關C.perfringens引起腹瀉在基因編碼蛋白功能分析等分子生物學領域尚不清楚,尤其是仔豬感染C.perfringens引起的免疫調節(jié)機制以及激活信號通路的調控等方面。本試驗以30頭二元豬(大白豬×長白豬)為試驗對象,隨機選取5頭作為對照組(NC),余下25頭經(jīng)口服誘導建立仔豬腹瀉模型,通過記錄腹瀉評分及精神狀...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
SUMMARY
英文縮略詞
第一章 文獻綜述
    1 仔豬腹瀉的危害
        1.1 仔豬腹瀉的主要原因
            1.1.1 生理性因素
            1.1.2 營養(yǎng)性腹瀉
            1.1.3 飼養(yǎng)管理和環(huán)境應激導致腹瀉
            1.1.4 疾病引起的腹瀉
                1.1.4.1 病毒性腹瀉
                1.1.4.2 寄生蟲性腹瀉
                1.1.4.3 細菌性腹瀉
        1.2 產氣莢膜梭菌
            1.2.1 產氣莢膜梭菌類型
            1.2.2 C型產氣莢膜梭菌的致病機制
            1.2.3 產氣莢膜梭菌疫苗的研究進展
    2 Toll樣受體的研究進展
        2.1 Toll樣受體的發(fā)現(xiàn)
        2.2 先天性免疫及特點
        2.3 TLRs與天然免疫和獲得性免疫的關系
        2.4 TLR4分布、結構及功能
        2.5 TLR4與腸道相關性疾病
        2.6 MyD88依賴性和非依賴性途徑
        2.7 NF-κB在免疫應答和炎癥反應中的作用
        2.8 TLRs信號通路下游炎性因子與腸道性疾病的機制
    3 研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    1 試驗仔豬
    2 試劑與儀器
        2.1 主要試劑
        2.2 主要儀器
    3 攻毒試驗
        3.1 C型產氣莢膜梭菌的培養(yǎng)
        3.2 攻毒
    4 總RNA的提取
        4.1 超微量分光光度計檢測mRNA的濃度和純度
        4.2 反轉錄
        4.3 引物的設計與合成
        4.4 目的基因普通PCR篩選擴增條件
        4.5 切膠回收
        4.6 連接反應
        4.7 菌體質粒重組及PCR鑒定
        4.8 測序
        4.9 qRT-PCR條件
    5 數(shù)據(jù)的處理
    6 Western blot檢測HMGB1蛋白在空腸和回腸中的表達
        6.1 腸組織總蛋白的提取
        6.2 標準曲線的繪制
        6.3 Western blot免疫印跡
    7 ELISA試驗
        7.1 組織勻漿的制備
        7.2 ELISA檢測細胞因子含量
        7.3 標準曲線的繪制
    8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理
第三章 結果與分析
    1 熒光定量PCR
        1.1 總RNA的提取結果
        1.2 擴增條件的優(yōu)化
        1.3 目的片段的確定
        1.4 qRT-PCR溶解曲線
        1.5 qRT-PCR擴增曲線
    2 目的基因mRNA的表達量
        2.1 TLR2、TLR4和TLR9在空腸和回腸組織中的表達
        2.2 MyD88和NF-κB在空腸和回腸組織中的表達
        2.3 TLRs信號通路相關基因在空腸和回腸組織中的表達
        2.4 TLRs信號通路中的細胞因子在空腸和回腸中的表達
    3 空腸和回腸組織中TLR4/HMGB1/NF-κB蛋白的表達
    4 ELISA的檢測結果
        4.1 空腸和回腸組織中細胞因子含量
        4.2 ELISA檢測血清中免疫球蛋白含量的結果
第四章 討論
    1 感染C.perfringens能夠激活TLRs信號通路
    2 感染C.perfringens能夠促使TLR4與其配體HMGB1的結合
    3 感染C.perfringens能夠激活TLRs下游炎癥因子
    4 感染C.perfringens影響血清中免疫球蛋白含量的變化
    小結
第五章 結論
參考文獻
附錄
致謝
個人簡介
導師簡介



本文編號：3878510