為制備新型鴨呼腸孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)群特異性抗原σB的多克隆抗體,研究采用RT-PCR方法擴(kuò)增NDRV-SD19/6201株σB基因編碼序列,將其克隆至原核表達(dá)載體pET-32a(+)中,在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE和Western blot鑒定結(jié)果顯示,NDRV群特異性抗原σB獲得高效表達(dá),重組蛋白分子量約55 ku,該重組蛋白具有良好的免疫活性,能與His-標(biāo)簽抗體及NDRV陽(yáng)性血清發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。以純化的重組蛋白免疫新西蘭兔,獲得高效價(jià)多克隆抗體,效價(jià)1∶12 800以上;間接免疫熒光試驗(yàn)表明,多克隆抗體能特異性識(shí)別多株NDRV毒株,具有較好的免疫反應(yīng)活性。研究為建立NDRV血清學(xué)診斷方法提供了材料,同時(shí)為探究σB蛋白生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。

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本文編號(hào)：3876857