課題組前期開展的中國荷斯坦牛產奶性狀全基因組關聯(lián)分析利用傳遞不平衡(L1-TDT)和回歸分析(MMRA)兩種統(tǒng)計分析方法同時檢測到38個顯著SNP位點。本研究旨在基于該GWAS結果進一步篩選和鑒定奶牛產奶性狀關鍵基因并進行功能驗證。 (1)位置候選基因鑒定及功能注釋：基于�；蚪M序列草圖(Btau4.2),采用生物信息學和比較基因組學方法進行了上述38個顯著SNPs的位置候選基因篩查和功能預測,最終鑒定到24個位置候選基因并確定了其物理位置、基因類型及功能注釋；基于此,進一步從該24個位置候選基因中挑選了10個基因,利用實時熒光定量RT-PCR技術進行了組織表達譜分析,結果發(fā)現(xiàn)EEF1D和PDE9A基因在泌乳期中國荷斯坦牛乳腺組織中的mRNA表達量均明顯高于其他7個組織(心肌,子宮,腎,肝,肺,卵巢和小腸)。結合前期GWAS結果,初步說明這2個基因與奶牛泌乳功能相關,將之確定為奶牛產奶性狀候選基因,進行細胞水平功能驗證。 (2)EEF1D和PDE9A基因可變剪接鑒定：通過NCBI和UCSC數(shù)據庫檢索發(fā)現(xiàn)EEF1D和PDE9A基因的mRNA序列不完整并且多次改變,同時人和小鼠EEF1D和...

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學位級別】：博士

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摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 奶牛分子育種的主要技術和研究方向
    1.2 可變剪接
    1.3 乳腺上皮細胞的體外培養(yǎng)
    1.4 基因功能驗證
    1.5 本研究的目的和主要內容
第二章 基于GWAS確定產奶性狀的候選基因
    2.1 試驗材料
    2.2 實驗方法
    2.3 結果與分析
    2.4 討論與結論
第三章 EEF1D和PDE9A基因的可變剪接研究
    3.1 試驗材料
    3.2 試驗方法
    3.3 結果與分析
    3.4 討論與結論
第四章 牛乳腺上皮原代細胞的分離與培養(yǎng)
    4.1 試驗材料
    4.2 試驗方法
    4.3 結果與分析
    4.4 討論與結論
第五章 候選基因過表達和干擾載體的構建
    5.1 材料與方法
    5.2 結果與分析
    5.3 討論與結論
第六章 總結和后續(xù)實驗計劃
    6.1 現(xiàn)有研究結果
    6.2 后續(xù)實驗計劃
參考文獻
致謝
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本文編號：3872574