弓形蟲病是由剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）感染引起的疾病，可感染幾乎所有的恒溫動物，是最流行的寄生原蟲之一。引起山羊胎兒死亡的重要原因之一就是剛地弓形蟲這種寄生原蟲。卵囊是由初次感染的貓產(chǎn)生的，這一寄生蟲階段與弓形蟲傳播感染有很大關系。妊娠期山羊初次感染弓形蟲可發(fā)生胎盤和胎兒感染，從而導致胎兒死亡和重吸收，流產(chǎn)或死胎。因此，及時、準確的診斷弓形蟲病是很有必要的。 病原學檢測方法耗時長，敏感性低；而血清學檢測結果易出現(xiàn)假陰性或假陽性；分子生物學診斷中，常規(guī)PCR敏感性較低，而巢式PCR敏感性、特異性都較高，但與常規(guī)PCR方法相比操作繁瑣且更易污染。為了盡量避免污染、簡化試驗步驟，本研究基于529bp重復序列，建立一套單管巢式PCR檢測弓形蟲的方法，并應用于奶山羊血液樣品中弓形蟲的檢測。其結果如下： 弓形蟲RH蟲株DNA（陽性對照）PCR擴增有216bp大小條帶且無雜帶，以阿米巴原蟲、微小隱孢子蟲、藍氏賈第蟲DNA為模板及陰性對照無條帶。用連續(xù)倍比稀釋的弓形蟲RH蟲株DNA為模板進行擴增，最低可檢測到1fg的DNA。 應用單管巢式PCR檢測奶山羊血液DNA樣品137份，其...

【文章頁數(shù)】：38 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻綜述
    第一章 弓形蟲病研究進展
        1.1 弓形蟲生活史
        1.2 弓形蟲與宿主之間的相互作用
        1.3 流行病學
        1.4 臨床癥狀
        1.5 病理變化
        1.6 診斷
            1.6.1 病原學檢查
            1.6.2 血清學試驗
            1.6.3 分子生物學診斷
        1.7 防治
            1.7.1 貓源感染
            1.7.2 綜合管理
            1.7.3 免疫接種
        1.8 公共衛(wèi)生與人畜共患病
研究內(nèi)容
    第二章 單管巢式 PCR 檢測弓形蟲方法的建立及應用
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試劑及藥品
            2.1.2 儀器與設備
            2.1.3 實驗樣本及來源
            2.1.4 樣本 DNA 的提取
            2.1.5 引物的設計與合成
            2.1.6 單管巢式 PCR 反應體系
            2.1.7 特異性試驗
            2.1.8 敏感性試驗
            2.1.9 應用性試驗
            2.1.10 結果判定
        2.2 結果與分析
            2.2.1 PCR 擴增結果
            2.2.2 特異性試驗結果
            2.2.3 敏感性試驗結果
            2.2.4 應用性試驗結果
            2.2.5 討論
        2.3 小結
    第三章 奶山羊感染弓形蟲的基因序列分析
        3.1 材料與方法
            3.1.1 試劑及儀器
            3.1.2 樣本及來源
            3.1.3 引物的設計與合成
            3.1.4 巢式 PCR 反應體系
            3.1.5 結果判定
        3.2 結果與討論
            3.2.1 ITS1 基因測序結果
            3.2.2 529bp 重復序列測序結果
            3.2.3 529bp 重復序列進化分析
            3.2.4 討論
        3.3 小結
結論
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3867202