弓形蟲病是由剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）感染引起的疾病，可感染幾乎所有的恒溫動(dòng)物，是最流行的寄生原蟲之一。引起山羊胎兒死亡的重要原因之一就是剛地弓形蟲這種寄生原蟲。卵囊是由初次感染的貓產(chǎn)生的，這一寄生蟲階段與弓形蟲傳播感染有很大關(guān)系。妊娠期山羊初次感染弓形蟲可發(fā)生胎盤和胎兒感染，從而導(dǎo)致胎兒死亡和重吸收，流產(chǎn)或死胎。因此，及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷弓形蟲病是很有必要的。 病原學(xué)檢測(cè)方法耗時(shí)長(zhǎng)，敏感性低；而血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果易出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性；分子生物學(xué)診斷中，常規(guī)PCR敏感性較低，而巢式PCR敏感性、特異性都較高，但與常規(guī)PCR方法相比操作繁瑣且更易污染。為了盡量避免污染、簡(jiǎn)化試驗(yàn)步驟，本研究基于529bp重復(fù)序列，建立一套單管巢式PCR檢測(cè)弓形蟲的方法，并應(yīng)用于奶山羊血液樣品中弓形蟲的檢測(cè)。其結(jié)果如下： 弓形蟲RH蟲株DNA（陽(yáng)性對(duì)照）PCR擴(kuò)增有216bp大小條帶且無(wú)雜帶，以阿米巴原蟲、微小隱孢子蟲、藍(lán)氏賈第蟲DNA為模板及陰性對(duì)照無(wú)條帶。用連續(xù)倍比稀釋的弓形蟲RH蟲株DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增，最低可檢測(cè)到1fg的DNA。 應(yīng)用單管巢式PCR檢測(cè)奶山羊血液DNA樣品137份，其...

【文章頁(yè)數(shù)】：38 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 弓形蟲病研究進(jìn)展
        1.1 弓形蟲生活史
        1.2 弓形蟲與宿主之間的相互作用
        1.3 流行病學(xué)
        1.4 臨床癥狀
        1.5 病理變化
        1.6 診斷
            1.6.1 病原學(xué)檢查
            1.6.2 血清學(xué)試驗(yàn)
            1.6.3 分子生物學(xué)診斷
        1.7 防治
            1.7.1 貓?jiān)锤腥?br>            1.7.2 綜合管理
            1.7.3 免疫接種
        1.8 公共衛(wèi)生與人畜共患病
研究?jī)?nèi)容
    第二章 單管巢式 PCR 檢測(cè)弓形蟲方法的建立及應(yīng)用
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試劑及藥品
            2.1.2 儀器與設(shè)備
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)樣本及來(lái)源
            2.1.4 樣本 DNA 的提取
            2.1.5 引物的設(shè)計(jì)與合成
            2.1.6 單管巢式 PCR 反應(yīng)體系
            2.1.7 特異性試驗(yàn)
            2.1.8 敏感性試驗(yàn)
            2.1.9 應(yīng)用性試驗(yàn)
            2.1.10 結(jié)果判定
        2.2 結(jié)果與分析
            2.2.1 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
            2.2.2 特異性試驗(yàn)結(jié)果
            2.2.3 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
            2.2.4 應(yīng)用性試驗(yàn)結(jié)果
            2.2.5 討論
        2.3 小結(jié)
    第三章 奶山羊感染弓形蟲的基因序列分析
        3.1 材料與方法
            3.1.1 試劑及儀器
            3.1.2 樣本及來(lái)源
            3.1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
            3.1.4 巢式 PCR 反應(yīng)體系
            3.1.5 結(jié)果判定
        3.2 結(jié)果與討論
            3.2.1 ITS1 基因測(cè)序結(jié)果
            3.2.2 529bp 重復(fù)序列測(cè)序結(jié)果
            3.2.3 529bp 重復(fù)序列進(jìn)化分析
            3.2.4 討論
        3.3 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3867202