本研究旨在了解鵝GnRH基因的CDS區(qū)序列及其蛋白表達情況,研究鵝GnRH蛋白的生理功能,為進一步闡明GnRH蛋白影響鵝繁殖性能的調(diào)控機制提供理論基礎(chǔ)。采用RT-PCR方法從溆浦鵝下丘腦擴增獲得GnRH基因的CDS區(qū)序列,將測序正確的DNA序列定向克隆到pET28a(+),構(gòu)建表達載體pET28a-GnRH,并轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)大腸桿菌表達目的蛋白,經(jīng)IPTG誘導后進行SDS-PAGE檢測和Western blot分析。結(jié)果顯示:獲得的溆浦鵝GnRH基因CDS區(qū)部分序列,含有270個核苷酸,編碼前體蛋白中的90個氨基酸;溆浦鵝GnRH基因CDS區(qū)在大腸桿菌中得到高效表達,GnRH基因CDS區(qū)的目的蛋白為9 900,最終測得菌體濕重為0.6g/L,純化后得到的蛋白為20³0mg/L;清晰檢測到GnRH基因表達的蛋白特異帶,試驗獲得的抗體對原核表達的GnRH蛋白具有特異性反應(yīng);鵝GnRH基因在動物進化中高度保守,研究得到的鵝GnRH前體蛋白可為進一步研究GnRH基因的生物功能以及其對鵝就巢、產(chǎn)蛋等繁殖性狀的影響奠定基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 主要試劑及菌種
    1.3 RT-PCR及擴增產(chǎn)物的純化
    1.4 GnRH基因的克隆和序列分析
    1.5 GnRH基因原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建、篩選與鑒定
    1.6 重組GnRH蛋白的誘導表達和純化
    1.7 制備GnRH抗血清
    1.8 重組pET28-GnRH蛋白的Western blot檢測
2 結(jié)果
    2.1 GnRH基因RT-PCR擴增
    2.2 GnRH重組質(zhì)粒鑒定
    2.3 GnRH重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
    2.4 GnRH基因的cDNA及氨基酸序列
    2.5 GnRH基因的系統(tǒng)進化樹
    2.6 GnRH基因在大腸桿菌中的表達
        2.6.1 GnRH-pET-28a重組質(zhì)粒雙酶切鑒定
        2.6.2 SDS-PAGE分析
    2.7 GnRH蛋白的純化與檢測
        2.7.1 Western blot檢測
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