本研究對廣西的5個奶牛場的75份乳房炎奶樣進行細菌分離鑒定,并根據(jù)鑒定結果對無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌4種主要的致病菌建立多重PCR快速診斷技術。并對該技術進行體系優(yōu)化和檢測評價,在此基礎上開發(fā)研制出可用于臨床實際中牛奶及乳制品的目標病原菌的快速檢測試劑盒。實驗內(nèi)容和結果如下： 1.通過對廣西的5個大型奶牛場75份乳樣進行細菌分離鑒定,實驗結果表明,75份乳樣中共檢出共135株病原菌微生物,其中金黃色葡萄球菌有24株,占17.87%；表皮葡萄球菌8株,占5.93%；腐生葡萄球菌5株,占3.70%；無乳鏈球菌17株,占12.59%；乳房鏈球菌9株,占6.67%;乳鏈球菌7株,占5.19%；停乳鏈球菌5株,占3.70%；糞鏈球菌5株,占3.70%；白色念珠菌12株,8.89%；酵母菌6株,占4.44%；大腸桿菌17株,占12.59%;沙門桿菌6株,占4.44%；福氏志賀桿菌2株,占1.48%；化膿棒狀桿菌2株,占1.48%;蠟樣芽孢桿菌10株,占7.42%。鑒定結果表明引起廣西地區(qū)奶牛乳房炎的主要致病菌是無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌以及白色念珠...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 奶牛乳房炎研究概述
    1.1 奶牛乳房炎的流行病學調(diào)查
    1.2 乳房炎的類型
        1.2.1 根據(jù)臨床表現(xiàn)癥狀分
    1.3 奶牛乳房炎的發(fā)病因素
        1.3.1 根據(jù)病原菌分
        1.3.2 環(huán)境衛(wèi)生
        1.3.3 營養(yǎng)因素
    1.4 奶牛乳房炎診斷和檢測方法研究進展
        1.4.1 奶牛乳房炎的診斷
        1.4.2 分子生物學檢測方法
    1.5 多重PCR檢測方法的研究及應用現(xiàn)狀
    1.6 PCR試劑盒研究現(xiàn)狀
    1.7 本課題的研究內(nèi)容與意義
第二章 廣西地區(qū)奶牛乳房炎致病菌的分離鑒定
    2.1 材料與方法
        2.1.1 乳樣來源
        2.1.2 儀器設備
        2.1.3 培養(yǎng)基和試劑
    2.2 乳樣采集
    2.3 致病菌的分離鑒定及純化
        2.3.1 致病菌的鑒定
        2.3.2 生化鑒定
    2.4 結果與分析
        2.4.1 流行病學調(diào)查結果
        2.4.2 討論
第三章 奶牛乳房炎4重PCR檢測方法的建立及優(yōu)化
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結果與分析
        3.2.1 單重PCR體系的建立與結果分析
        3.2.2 單重PCR特異性結果
        3.2.3 單重PCR敏感性結果分析
        3.2.4 多重PCR體系的優(yōu)化結果
        3.2.5 多重PCR特異性結果
        3.2.6 4重PCR檢測臨床奶樣結果
    3.3 討論
        3.3.1 模板的制備
        3.3.2 引物的設計
        3.3.3 體系的優(yōu)化
        3.3.4 敏感性的結果分析
        3.3.5 多重PCR假陽性分析
        3.3.6 假陽性試驗控制
        3.3.7 PCR反應添加劑的分析
第四章 四重PCR快速檢測試劑盒的組裝、保存期試驗及使用方法
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 試劑
        4.1.3 儀器
        4.1.4 實驗方法
        4.1.5 試劑盒的使用方法
    4.2 結果與討論
        4.2.1 不同保存條件對試劑盒的影響
        4.2.2 檢測試劑盒保存期試驗結果
        4.2.3 試劑盒臨床檢測結果
        4.2.4 討論
第五章 小結、創(chuàng)新點與展望
    5.1 研究小結
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 展望
參考文獻
附錄1 擴增序列
附錄2 英文縮寫詞表
附錄3 部分細菌分離圖
致謝
碩士期間發(fā)表論文及專利



本文編號：3865698