偽狂犬病(PR)是由偽狂犬病毒(PRV)引起的多種家畜、家禽和野生動(dòng)物的一種以發(fā)熱、奇癢(除豬外)及腦脊髓炎為主要癥狀的一種急性傳染病。PRV可以感染不同年齡段的豬,主要引起妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎;哺乳仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀,衰竭死亡,死亡率幾乎高達(dá)100%。我國(guó)自1947年劉永純從貓?bào)w內(nèi)分離到PRV以來(lái),已有20多個(gè)省市報(bào)道發(fā)生了該病。在生產(chǎn)實(shí)踐中,主要依靠疫苗尤其是基因工程缺失疫苗對(duì)PR進(jìn)行防制,從而使該病得到有效控制。但2012年春季以來(lái),在河南、吉林、黑龍江等多地區(qū)使用PRV基因缺失苗免疫的豬場(chǎng)出現(xiàn)疑似PR病例,本試驗(yàn)分離并鑒定了 PRV河南流行株,進(jìn)行了gE、gC全基因測(cè)序及相關(guān)生物學(xué)特性研究,探索了河南分離株NY的免疫原性。采用PCR方法對(duì)河南不同地市采集的疑似PRV感染病料進(jìn)行PCR檢測(cè),將PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的病料接種ST細(xì)胞,分離到9株P(guān)RV,分別命名為NY、ZK、M5、JY、GY、MZ1、MZ2、LGX、ZM。9株病毒均能在ST細(xì)胞上出現(xiàn)較穩(wěn)定的CPE,且均能擴(kuò)增出特異性gE基因片段(429bp),傳代至第7代時(shí)病毒毒力效價(jià)基本穩(wěn)定在105.6TCID50/0.1mL...

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
文獻(xiàn)綜述
    1 偽狂犬病毒的病原學(xué)
        1.1 PRV的分類(lèi)地位
        1.2 PRV的形態(tài)和理化特性
        1.3 PRV的血凝性
        1.4 PRV的培養(yǎng)特性
        1.5 PRV的病原性
        1.6 PRV對(duì)豬的致病性
    2 偽狂犬病毒的流行現(xiàn)狀及危害
    3 偽狂犬病毒的分子生物學(xué)特性
        3.1 偽狂犬病毒的基因組
        3.2 偽狂犬病毒的蛋白及其功能
    4 PR的免疫預(yù)防
        4.1 滅活疫苗
        4.2 自然弱毒苗
        4.3 基因缺失疫苗
        4.4 發(fā)展中的疫苗
引言
試驗(yàn)一 豬偽狂犬病毒河南流行株的分離鑒定和生物學(xué)特性研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 引物設(shè)計(jì)
        1.3 組織病料中PRV DNA的PCR檢測(cè)
        1.4 病毒的分離與培養(yǎng)
        1.5 PRV gE基因的檢測(cè)
        1.6 病毒滴度TCID₅₀的測(cè)定
        1.7 PRV NY株理化特性研究
        1.8 PRV NY株形態(tài)學(xué)觀察
        1.9 PRV NY株形態(tài)學(xué)觀察
    2 結(jié)果
        2.1 組織病料中PRV DNA的PCR檢測(cè)結(jié)果
        2.2 PRV的細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞病變觀察
        2.3 PRV gE基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.4 病毒滴度TCID₅₀結(jié)果
        2.5 病毒感染小鼠試驗(yàn)結(jié)果
        2.6 PRV NY株理化特性研究結(jié)果
        2.7 病毒形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果
    3 結(jié)論與討論
試驗(yàn)二 豬偽狂犬病毒河南流行株gE全基因的克隆與序列分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 引物設(shè)計(jì)
        1.3 病毒DNA的提取及gE全基因的擴(kuò)增
        1.4 PRV gE全基因的克隆和鑒定
        1.5 PRV gE全基因的序列分析
    2 結(jié)果
        2.1 PRV gE全基因的擴(kuò)增結(jié)果
        2.2 PRV gE全基因重組質(zhì)粒的PCR鑒定
        2.3 PRV gE全基因重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.4 PRV gE全基因的測(cè)序結(jié)果
        2.5 PRV分離株gE全基因序列同源性分析
        2.6 PRV分離株gE全基因推導(dǎo)氨基酸的序列分析
        2.7 PRV分離株gE全基因系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化關(guān)系分析
    3 結(jié)論與討論
試驗(yàn)三 豬偽狂犬病毒河南流行株gC全基因的克隆與序列分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 引物設(shè)計(jì)
        1.3 病毒DNA的提取及gC全基因的擴(kuò)增
        1.4 PRVgC全基因的克隆和鑒定
        1.5 PRVgC全基因的序列分析
    2 結(jié)果
        2.1 PRV gC全基因的擴(kuò)增結(jié)果
        2.2 PRV gC全基因重組質(zhì)粒的PCR鑒定
        2.3 PRV gC全基因重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.4 PRV gC全基因的測(cè)序結(jié)果
        2.5 PRV分離株gC全基因序列同源性分析
        2.6 PRV分離株gC全基因推導(dǎo)氨基酸的序列分析
        2.7 PRV分離株gC全基因系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化關(guān)系分析
    3 結(jié)論與討論
試驗(yàn)四 豬偽狂犬病毒NY株的免疫原性分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 病毒滴度TCID₅₀測(cè)定結(jié)果
        2.2 病毒滅活效果檢驗(yàn)
        2.3 PRV NY株乳化劑的鑒定
        2.4 PRV NY株攻毒試驗(yàn)結(jié)果
        2.5 PRV NY株中和試驗(yàn)結(jié)果
    3 結(jié)論與討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
Abstract



本文編號(hào)：3860803