為研究豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)在豬肺臟組織中的感染特性,本研究建立了高度分化的豬呼吸系統(tǒng)體外培養(yǎng)模型-豬肺組織精細(xì)切片(PCLS)。該培養(yǎng)體系包含肺臟組織中多種相關(guān)細(xì)胞并能夠體現(xiàn)出肺臟組織的生理結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能。本研究針對(duì)制備的豬PCLS進(jìn)行生物學(xué)活性的鑒定,利用評(píng)估支氣管上皮細(xì)胞纖毛擺動(dòng)百分比的方法檢測(cè)支氣管上皮細(xì)胞纖毛活性,結(jié)果顯示豬PCLS制備良好,在制備10 d以后仍保持95%以上的纖毛活性;利用活/死細(xì)胞染色法測(cè)定制備的豬PCLS體外培養(yǎng)后活細(xì)胞的比例,結(jié)果顯示制備的豬PCLS在體外培養(yǎng)7 d后支氣管上皮細(xì)胞和肺泡細(xì)胞仍為活細(xì)胞;利用間接免疫熒光試驗(yàn)測(cè)定豬PCLS中上皮細(xì)胞、杯狀細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)的完整性與分布情況,結(jié)果顯示制備的豬PCLS上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞保存完整且豬PCLS中包含豐富的PAM。利用6株不同PRRSV分離株(HuN4、XD-15、WK-34、WK-38、LCL-75和DL-1510)以2.5×10⁵TCID₅₀/片的劑量感染豬PCLS,檢測(cè)不同PRRSV分離株在豬PCLS中的感染特性,結(jié)果表明...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
    1.2豬PCLS的制備
    1.3 支氣管上皮纖毛活性評(píng)估
    1.4 豬PCLS細(xì)胞活性鑒定
    1.5 支氣管上皮細(xì)胞與PAM的間接免疫熒光檢測(cè)（IFA)
    1.6 PRRSV感染豬PCLS及病毒滴度測(cè)定
    1.7 感染病毒量的熒光定量PCR檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 支氣管上皮纖毛活性評(píng)估
    2.2 豬PCLS細(xì)胞活性鑒定
    2.3 杯狀細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞和PAM鑒定
    2.4 PRRSV在豬PCLS中生長(zhǎng)特性
    2.5 PRRSV在豬PCLS中基因拷貝數(shù)的檢測(cè)結(jié)果
3 討論



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