背景:腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment,TME)是腫瘤細胞逃避免疫監(jiān)視和產(chǎn)生耐藥性的重要場所,同時也是循環(huán)腫瘤細胞定殖和產(chǎn)生轉(zhuǎn)移灶的關(guān)鍵。腫瘤內(nèi)異質(zhì)性(intra-tumor heterogeneity,ITH)描述了腫瘤細胞所顯示的不同形態(tài)學(xué)、基因和表型特征,這種性質(zhì)既表現(xiàn)在不同類型的腫瘤細胞之間,也表現(xiàn)在同種腫瘤細胞內(nèi)。研究表明ITH是導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移和耐藥性的重要因素。然而,目前關(guān)于腫瘤塊的解剖學(xué)邊緣和內(nèi)部之間的ITH和免疫微環(huán)境研究相對不足。目的:本研究使用高轉(zhuǎn)移性的4T1腫瘤小鼠模型,通過原代細胞培養(yǎng)腫瘤塊的解剖學(xué)邊緣和內(nèi)部的細胞獲得腫瘤細胞株,初步探究不同解剖學(xué)位置腫瘤細胞的腫瘤內(nèi)異質(zhì)性和免疫微環(huán)境,為乳腺癌腫瘤轉(zhuǎn)移及耐藥性研究提供相關(guān)參考和支持。方法:(1)利用小鼠4T1乳腺癌模型,HE染色鏡檢觀察等方法,探究小鼠乳腺癌腫瘤內(nèi)部結(jié)構(gòu)。PCR法檢測間質(zhì)細胞瘤和上皮細胞瘤炎性因子及其受體的表達差異;流式細胞術(shù)檢測間質(zhì)細胞瘤和上皮細胞瘤中淋巴細胞和髓性來源免疫細胞比例差異。(2)構(gòu)建上皮細胞瘤、間質(zhì)細胞瘤尾靜脈注射/原位移植模型。利用石蠟包埋切片染色等技術(shù)探...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 乳腺癌腫瘤內(nèi)異質(zhì)性
        1.1.1 腫瘤內(nèi)異質(zhì)性組織病理學(xué)特征
        1.1.2 腫瘤微環(huán)境與腫瘤內(nèi)異質(zhì)性
    1.2 乳腺癌腫瘤微環(huán)境中免疫細胞構(gòu)成
        1.2.1 腫瘤浸潤髓性細胞
        1.2.2 腫瘤浸潤淋巴細胞
        1.2.3 腫瘤浸潤樹突細胞
    1.3 腫瘤轉(zhuǎn)移微環(huán)境
        1.3.1 腫瘤細胞轉(zhuǎn)移機制
        1.3.2 轉(zhuǎn)移性腫瘤微環(huán)境
        1.3.3 腫瘤微環(huán)境中的低氧環(huán)境
    1.4 本試驗?zāi)康募耙饬x
第二章 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤基因表達差異及其微環(huán)境免疫細胞組成
    2.1 試驗材料與試劑
        2.1.1 試驗細胞株
        2.1.2 試驗動物
        2.1.3 試劑及儀器
        2.1.4 工作液配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 細胞傳代培養(yǎng)
        2.2.2 建立小鼠4T1 乳腺癌模型
        2.2.3 HE染色
        2.2.4 RNA提取與cDNA合成
        2.2.5 RT-PCR步驟和程序
        2.2.6 基因表達量算法
        2.2.7 單細胞懸液制備及抗體標(biāo)記
        2.2.8 流式細胞術(shù)上機檢測
        2.2.9 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 4T1 小鼠乳腺癌腫瘤模型建立與腫瘤內(nèi)部細胞分層
        2.3.2 上皮細胞瘤、間質(zhì)細胞瘤和4T1 細胞中Toll樣受體、整合素、趨化因子受體等基因表達的差異
        2.3.3 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤微環(huán)境中淋巴細胞和髓性細胞的比例分析
第三章 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤細胞的篩選及致瘤動物模型的建立
    3.1 試驗材料與試劑
        3.1.1 試驗動物
        3.1.2 試劑及儀器
        3.1.3 工作液配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤細胞篩選
        3.2.2 吉姆薩染色
        3.2.3 建立小鼠上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤腫瘤模型
        3.2.4 建立小鼠4T1 乳腺癌腫瘤模型(陽性對照組)
        3.2.5 腫瘤生長曲線及小鼠解剖
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤細胞篩選
        3.3.2 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤移植小鼠模型致瘤性與生存曲線差異
        3.3.3 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤小鼠移植模型器官重量及轉(zhuǎn)移情況
第四章 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤移植模型臟器轉(zhuǎn)移情況及免疫細胞比例變化趨勢
    4.1 試驗材料與試劑
        4.1.1 試驗試劑
        4.1.2 工作液配制
    4.2 試驗方法
        4.2.1 小鼠解剖與組織固定
        4.2.2 石蠟包埋與石蠟切片制作
        4.2.3 HE染色
        4.2.4 單細胞懸液制備及抗體標(biāo)記
        4.2.5 流式細胞術(shù)上機檢測
        4.2.6 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤尾靜脈注射/原位移植模型器官轉(zhuǎn)移灶情況
        4.3.2 上皮細胞瘤和間質(zhì)細胞瘤小鼠尾靜脈移植模型中免疫細胞比例變化趨勢
第五章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
    5.2 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章



本文編號：3856936