發(fā)布時(shí)間：2023-10-22 09:41

　　目的:探索豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)病毒樣顆粒(VLPs)的高效組裝技術(shù),提高VLPs的穩(wěn)定性。方法:利用大腸桿菌表達(dá)PCV2 Cap蛋白自組裝為VLPs,分析不同離子強(qiáng)度下VLPs的穩(wěn)定性。利用切向流技術(shù)添加尿素,降低p H,可使VLPs解組裝,利用硫酸銨分級(jí)沉淀、陰離子交換層析純化獲得Cap蛋白,去除尿素,提高離子強(qiáng)度和pH,實(shí)現(xiàn)VLPs的高效再組裝。結(jié)果:PCV2 Cap蛋白自組裝VLPs在150mmol/L NaCl下穩(wěn)定性較差,而在500mmol/L NaCl下可提高VLPs的穩(wěn)定性,但仍較易發(fā)生聚集,核酸含量均較高。在150mmol/L NaCl、300mmol/L尿素和p H 5.5的緩沖體系條件下,能夠使VLPs解組裝。經(jīng)25%～50%飽和硫酸銨(V/V)分級(jí)沉淀粗純,陰離子交換層析500mmol/L NaCl下洗脫獲得精純Cap蛋白,蛋白質(zhì)純度≥95%,并能夠有效去除核酸。通過切向流技術(shù)去除體系中的尿素,并將NaCl濃度提高至1mol/L、p H提高至8.0,改變蛋白質(zhì)表面靜電荷分布,實(shí)現(xiàn)VLPs的高效、均一再組裝,組裝效率≥99%,回收率為65.85%,并明顯提高V...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株
    1.2 主要儀器和試劑
    1.3 PCV2 r Cap蛋白的表達(dá)與純化
    1.4 VLPs的粒徑檢測(cè)和Zeta電位檢測(cè)
    1.5 VLPs的透射電鏡(TEM)檢測(cè)
    1.6 VLPs的高效液相尺寸排阻色譜(HPSEC)檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 PCV2 r Cap蛋白的純化與自組裝VLPs的鑒定
    2.2 自組裝PCV2 VLPs的穩(wěn)定性
    2.3 PCV2 VLPs的解組裝
    2.4 解組裝PCV2 r Cap蛋白的純化
    2.5 PCV2 VLPs的再組裝
    2.6 再組裝PCV2 VLPs的穩(wěn)定性
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