脂肪細(xì)胞分化是一個(gè)高度精細(xì)的調(diào)控過(guò)程,多種轉(zhuǎn)錄因子、信號(hào)通路及miRNA均在脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程發(fā)揮重要的作用。在眾多調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄因子中，PPARγ和C/EBPα發(fā)揮核心作用，被稱為脂肪細(xì)胞分化的主效基因（master genes）。它們能夠激活下游在脂質(zhì)積累及脂代謝發(fā)揮重要作用的酶及功能蛋白的表達(dá)，如脂肪酸結(jié)合蛋白4（FABP4），脂肪酸合酶（FAS），脂蛋白脂酶（LPL）。 近年來(lái)，關(guān)于miRNAs在脂肪細(xì)胞分化中的報(bào)道逐漸增多。實(shí)驗(yàn)室李國(guó)喜等(Li etal.2011)對(duì)不同發(fā)育階段豬脂肪組織miRNAs的solexa測(cè)序結(jié)果顯示miR-125a在豬脂肪組織中高豐度表達(dá)，并且在240日齡大白豬背膘中的表達(dá)比7日齡小豬高3倍多，因此我們推測(cè)miR-125a在脂肪組織發(fā)育中發(fā)揮重要作用。 本實(shí)驗(yàn)以豬前體脂肪細(xì)胞以及3T3L1前體脂肪細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)材料，采用生物信息學(xué)方法對(duì)miR-125a進(jìn)行靶基因分析，綜合TargetScan和PicTar等的預(yù)測(cè)結(jié)果顯示miR-125a可靶作用于ERRα，并用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-125a的靶基因ERRα。隨后使用Real time ...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 脂肪細(xì)胞的起源與分布
    1.2 脂肪細(xì)胞的類型
    1.3 脂肪細(xì)胞分化模型
    1.4 脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程
    1.5 表觀遺傳學(xué)與脂肪細(xì)胞分化
        1.5.1 組蛋白修飾
        1.5.2 miRNA 與脂肪細(xì)胞分化
    1.6 miRNA 起源與調(diào)節(jié)
    1.7 miR‐125a 的研究進(jìn)展
    1.8 雌激素受體相關(guān)受體α
第二章 MIR‐125a 在豬原代脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的作用研究
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 豬前體脂肪細(xì)胞的分離獲得與培養(yǎng)
        2.2.3 豬前體脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及油紅 O 染色
        2.2.4 TRIzol 法提取總 RNA
        2.2.5 反轉(zhuǎn)錄及 Real time‐qPCR
        2.2.6 細(xì)胞中總蛋白的提取
        2.2.7 Western Blot 分析
        2.2.8 豬 ERRα 3′UTR 的克隆
        2.2.9 psiCHECK‐ERRα‐UTR 載體的構(gòu)建
        2.2.10 psiCHECK‐ERRα‐UTR‐muta 突變載體構(gòu)建(Ho et al. 1989)
        2.2.11 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)分析
    2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 MiR‐125a 靶基因預(yù)測(cè)及熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證
        2.4.2 MiR‐125a 組織表達(dá)譜
        2.4.3 豬前體脂肪細(xì)胞分化模型的建立及 miR‐125a 脂肪細(xì)胞分化時(shí)序表達(dá)
        2.4.4 使用 agomir 過(guò)表達(dá) miR‐125a 抑制豬前體脂肪細(xì)胞分化
        2.4.5 使用 antagomir 抑制 miR‐125a 促進(jìn)豬前體脂肪細(xì)胞分化
        2.4.6 在豬前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中 miR‐125a 靶向 ERRα
    2.5 討論
第三章 MIR‐125a‐5p 在 3T3‐L1 前體脂肪細(xì)胞分化中發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 組織中ＲNA 的提取
        3.2.3 3T3‐L1 細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化
        3.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.5 RNA 提取及 Real‐time qPCR
        3.2.6 Western blot 分析
        3.2.7 油紅 O 染色及定量
    3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 研究結(jié)果
        3.4.1 MiR‐125a‐5p 在小鼠各組織中的表達(dá)譜
        3.4.2 MiR‐125a‐5p 在 3T3‐L1 分化過(guò)程中的時(shí)序表達(dá)
        3.4.3 過(guò)表達(dá) miR‐125a‐5p 抑制 3T3‐L1 前體脂肪細(xì)胞分化
        3.4.4 抑制 miR‐125a‐5p 促進(jìn) 3T3‐L1 前體脂肪細(xì)胞分化
    3.5 討論
結(jié)論
    一、MIR‐125A通過(guò)靶向 ERRΑ抑制豬前體脂肪細(xì)胞分化
    二、MIR‐125A‐5P在 3T3‐L1 前體脂肪細(xì)胞分化中發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用
創(chuàng)新點(diǎn)
進(jìn)一步研究?jī)?nèi)容
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3853183