脂肪細胞分化是一個高度精細的調控過程,多種轉錄因子、信號通路及miRNA均在脂肪細胞的分化過程發(fā)揮重要的作用。在眾多調控脂肪細胞分化的轉錄因子中，PPARγ和C/EBPα發(fā)揮核心作用，被稱為脂肪細胞分化的主效基因（master genes）。它們能夠激活下游在脂質積累及脂代謝發(fā)揮重要作用的酶及功能蛋白的表達，如脂肪酸結合蛋白4（FABP4），脂肪酸合酶（FAS），脂蛋白脂酶（LPL）。 近年來，關于miRNAs在脂肪細胞分化中的報道逐漸增多。實驗室李國喜等(Li etal.2011)對不同發(fā)育階段豬脂肪組織miRNAs的solexa測序結果顯示miR-125a在豬脂肪組織中高豐度表達，并且在240日齡大白豬背膘中的表達比7日齡小豬高3倍多，因此我們推測miR-125a在脂肪組織發(fā)育中發(fā)揮重要作用。 本實驗以豬前體脂肪細胞以及3T3L1前體脂肪細胞系作為實驗材料，采用生物信息學方法對miR-125a進行靶基因分析，綜合TargetScan和PicTar等的預測結果顯示miR-125a可靶作用于ERRα，并用熒光素酶報告系統(tǒng)驗證miR-125a的靶基因ERRα。隨后使用Real time ...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 脂肪細胞的起源與分布
    1.2 脂肪細胞的類型
    1.3 脂肪細胞分化模型
    1.4 脂肪細胞的分化過程
    1.5 表觀遺傳學與脂肪細胞分化
        1.5.1 組蛋白修飾
        1.5.2 miRNA 與脂肪細胞分化
    1.6 miRNA 起源與調節(jié)
    1.7 miR‐125a 的研究進展
    1.8 雌激素受體相關受體α
第二章 MIR‐125a 在豬原代脂肪細胞分化過程中的作用研究
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 豬前體脂肪細胞的分離獲得與培養(yǎng)
        2.2.3 豬前體脂肪細胞的誘導分化及油紅 O 染色
        2.2.4 TRIzol 法提取總 RNA
        2.2.5 反轉錄及 Real time‐qPCR
        2.2.6 細胞中總蛋白的提取
        2.2.7 Western Blot 分析
        2.2.8 豬 ERRα 3′UTR 的克隆
        2.2.9 psiCHECK‐ERRα‐UTR 載體的構建
        2.2.10 psiCHECK‐ERRα‐UTR‐muta 突變載體構建(Ho et al. 1989)
        2.2.11 雙熒光素酶報告基因檢測分析
    2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2.4 結果
        2.4.1 MiR‐125a 靶基因預測及熒光素酶報告基因驗證
        2.4.2 MiR‐125a 組織表達譜
        2.4.3 豬前體脂肪細胞分化模型的建立及 miR‐125a 脂肪細胞分化時序表達
        2.4.4 使用 agomir 過表達 miR‐125a 抑制豬前體脂肪細胞分化
        2.4.5 使用 antagomir 抑制 miR‐125a 促進豬前體脂肪細胞分化
        2.4.6 在豬前體脂肪細胞分化過程中 miR‐125a 靶向 ERRα
    2.5 討論
第三章 MIR‐125a‐5p 在 3T3‐L1 前體脂肪細胞分化中發(fā)揮負調控作用
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 組織中ＲNA 的提取
        3.2.3 3T3‐L1 細胞培養(yǎng)及誘導分化
        3.2.4 細胞轉染
        3.2.5 RNA 提取及 Real‐time qPCR
        3.2.6 Western blot 分析
        3.2.7 油紅 O 染色及定量
    3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.4 研究結果
        3.4.1 MiR‐125a‐5p 在小鼠各組織中的表達譜
        3.4.2 MiR‐125a‐5p 在 3T3‐L1 分化過程中的時序表達
        3.4.3 過表達 miR‐125a‐5p 抑制 3T3‐L1 前體脂肪細胞分化
        3.4.4 抑制 miR‐125a‐5p 促進 3T3‐L1 前體脂肪細胞分化
    3.5 討論
結論
    一、MIR‐125A通過靶向 ERRΑ抑制豬前體脂肪細胞分化
    二、MIR‐125A‐5P在 3T3‐L1 前體脂肪細胞分化中發(fā)揮負調控作用
創(chuàng)新點
進一步研究內容
參考文獻
附錄
致謝
個人簡介



本文編號：3853183