為了豐富牦牛細胞紅蛋白（Cytoglobin，CYGB）遺傳信息，本研究對牦牛的CYGB基因進行了克隆，成功獲得了全序列，并運用Lasergene7、PredictProtein等相關的生物學軟件預測分析了CYGB的基因編碼序列、氨基酸序列、基本理化性質、高級結構等；同時采用PCR-SSCP技術檢測了300頭甘南牦牛和283頭甘肅河西地區(qū)西門塔爾牛CYGB基因的3個內含子部分擴增區(qū)段的遺傳多態(tài)性。 1.牦牛CYGB基因的克隆與生物信息學分析結果顯示：克隆獲得的牦牛CYGB基因序列全長8484bp，包括4個外顯子和3個內含子，外顯子的大小分別為143bp，232bp，164bp和34bp，內含子的大小分別為5175bp，280bp和2379bp；牦牛CYGB基因的G+C%（60.32%）比例大于A+T%(39.68%)；牦牛CYGB基因的ORF編碼一個有190個氨基酸殘基構成的可溶性蛋白，其相對分子質量為21399Da，理論等電點（pI）為6.32，其二級結構由α-螺旋（64%）和無規(guī)卷曲（36%）構成，歸為全α類蛋白；牦牛CYGB系統(tǒng)進化與物種進化基本一致，且與黃牛、綿羊等物種之間的同...

【文章頁數】：46 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
第一部分 文獻綜述
    1 CYGB 的結構
        1.1 蛋白結構
        1.2 基因結構
    2 CYGB 的功能
        2.1 攜氧和儲氧功能
        2.2 氧感受器功能
        2.3 神經細胞保護功能
    3 CYGB 與相關疾病的研究
        3.1 CYGB 與腫瘤
        3.2 CYGB 與再灌注損傷
        3.3 CYGB 與肝纖維化
第二部分 牦牛 CYGB 基因序列分析與內含子多態(tài)性研究
    1 材料
        1.1 血液樣本
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設備
        1.4 溶液的配制
            1.4.1 基因組 DNA 提取所用溶液
            1.4.2 轉化、克隆所用溶液
            1.4.3 凝膠電泳所用溶液
    2 方法
        2.1 基因組 DNA 提取
        2.2 PCR 擴增
            2.2.1 引物設計
            2.2.2 引物溶液的配制
            2.2.3 PCR 最佳條件的建立
            2.2.4 PCR 產物檢測
        2.3 克隆測序
            2.3.1 目的片斷的回收
            2.3.2 目的 DNA 與克隆載體的連接
            2.3.3 轉化與陽性克隆的篩選
            2.3.4 重組 DNA 的鑒定及序列測定
        2.4 SSCP 凝膠電泳
            2.4.1 凝膠制備及電泳
            2.4.2 銀染
            2.4.3 測序
        2.5 生物信息學分析
        2.6 多樣性分析
            2.6.1 序列分析
            2.6.2 遺傳多樣性分析
    3 結果
        3.1 牦牛 CYGB 基因全序列的分析
            3.1.1 CYGB 基因的擴增與測序結果
            3.1.2 牦牛 CYGB 氨基酸序列分析
            3.1.3 牦牛與其他物種 CYGB 氨基酸序列同源性分析
        3.2 甘南牦牛和甘肅河西西門塔爾牛 CYGB 基因內含子的 SSCP 分析
            3.2.1 PCR 結果
            3.2.2 SSCP 測序結果與分析
            3.2.3 等位基因頻率和基因型頻率
            3.2.4 兩個群體 CYGB 基因內含子的遺傳多樣性分析
    4 討論
        4.1 牦牛 CYGB 基因序列
            4.1.1 CYGB 基因結構
            4.1.2 CYGB 性質
            4.1.3 CYGB 基因同源分析
        4.2 甘南牦牛與河西西門塔爾牛 CYGB 基因內含子檢測區(qū)域的遺傳特征
        4.3 SSCP 檢測的影晌因素
結論
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介



本文編號：3851023