為了豐富牦牛細(xì)胞紅蛋白（Cytoglobin，CYGB）遺傳信息，本研究對(duì)牦牛的CYGB基因進(jìn)行了克隆，成功獲得了全序列，并運(yùn)用Lasergene7、PredictProtein等相關(guān)的生物學(xué)軟件預(yù)測(cè)分析了CYGB的基因編碼序列、氨基酸序列、基本理化性質(zhì)、高級(jí)結(jié)構(gòu)等；同時(shí)采用PCR-SSCP技術(shù)檢測(cè)了300頭甘南牦牛和283頭甘肅河西地區(qū)西門塔爾牛CYGB基因的3個(gè)內(nèi)含子部分?jǐn)U增區(qū)段的遺傳多態(tài)性。 1.牦牛CYGB基因的克隆與生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示：克隆獲得的牦牛CYGB基因序列全長(zhǎng)8484bp，包括4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，外顯子的大小分別為143bp，232bp，164bp和34bp，內(nèi)含子的大小分別為5175bp，280bp和2379bp；牦牛CYGB基因的G+C%（60.32%）比例大于A+T%(39.68%)；牦牛CYGB基因的ORF編碼一個(gè)有190個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的可溶性蛋白，其相對(duì)分子質(zhì)量為21399Da，理論等電點(diǎn)（pI）為6.32，其二級(jí)結(jié)構(gòu)由α-螺旋（64%）和無規(guī)卷曲（36%）構(gòu)成，歸為全α類蛋白；牦牛CYGB系統(tǒng)進(jìn)化與物種進(jìn)化基本一致，且與黃牛、綿羊等物種之間的同...

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 CYGB 的結(jié)構(gòu)
        1.1 蛋白結(jié)構(gòu)
        1.2 基因結(jié)構(gòu)
    2 CYGB 的功能
        2.1 攜氧和儲(chǔ)氧功能
        2.2 氧感受器功能
        2.3 神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)功能
    3 CYGB 與相關(guān)疾病的研究
        3.1 CYGB 與腫瘤
        3.2 CYGB 與再灌注損傷
        3.3 CYGB 與肝纖維化
第二部分 牦牛 CYGB 基因序列分析與內(nèi)含子多態(tài)性研究
    1 材料
        1.1 血液樣本
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 溶液的配制
            1.4.1 基因組 DNA 提取所用溶液
            1.4.2 轉(zhuǎn)化、克隆所用溶液
            1.4.3 凝膠電泳所用溶液
    2 方法
        2.1 基因組 DNA 提取
        2.2 PCR 擴(kuò)增
            2.2.1 引物設(shè)計(jì)
            2.2.2 引物溶液的配制
            2.2.3 PCR 最佳條件的建立
            2.2.4 PCR 產(chǎn)物檢測(cè)
        2.3 克隆測(cè)序
            2.3.1 目的片斷的回收
            2.3.2 目的 DNA 與克隆載體的連接
            2.3.3 轉(zhuǎn)化與陽(yáng)性克隆的篩選
            2.3.4 重組 DNA 的鑒定及序列測(cè)定
        2.4 SSCP 凝膠電泳
            2.4.1 凝膠制備及電泳
            2.4.2 銀染
            2.4.3 測(cè)序
        2.5 生物信息學(xué)分析
        2.6 多樣性分析
            2.6.1 序列分析
            2.6.2 遺傳多樣性分析
    3 結(jié)果
        3.1 牦牛 CYGB 基因全序列的分析
            3.1.1 CYGB 基因的擴(kuò)增與測(cè)序結(jié)果
            3.1.2 牦牛 CYGB 氨基酸序列分析
            3.1.3 牦牛與其他物種 CYGB 氨基酸序列同源性分析
        3.2 甘南牦牛和甘肅河西西門塔爾牛 CYGB 基因內(nèi)含子的 SSCP 分析
            3.2.1 PCR 結(jié)果
            3.2.2 SSCP 測(cè)序結(jié)果與分析
            3.2.3 等位基因頻率和基因型頻率
            3.2.4 兩個(gè)群體 CYGB 基因內(nèi)含子的遺傳多樣性分析
    4 討論
        4.1 牦牛 CYGB 基因序列
            4.1.1 CYGB 基因結(jié)構(gòu)
            4.1.2 CYGB 性質(zhì)
            4.1.3 CYGB 基因同源分析
        4.2 甘南牦牛與河西西門塔爾牛 CYGB 基因內(nèi)含子檢測(cè)區(qū)域的遺傳特征
        4.3 SSCP 檢測(cè)的影晌因素
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3851023