發(fā)布時(shí)間：2023-09-17 09:03

　　由于在人類(lèi)疾病治療與畜牧業(yè)生產(chǎn)中濫用抗生素,導(dǎo)致了細(xì)菌耐藥性問(wèn)題空前嚴(yán)峻。一個(gè)典型例子是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)在臨床上的分離比例不斷增加,給畜禽養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重問(wèn)題。但是目前獸醫(yī)臨床中能夠有效治療MRSA感染的藥物卻十分有限,因此防治MRSA已經(jīng)成為當(dāng)今世界范圍內(nèi)防治畜禽細(xì)菌感染的難題和熱點(diǎn)。本研究以MRSA標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC33591)和臨床分離株為研究對(duì)象,以篩選具有抗菌活性的中藥單體為目標(biāo),開(kāi)展綿馬酚抗MRSA的機(jī)制研究;以微量肉湯稀釋法測(cè)定出藥物的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC),根據(jù)MIC和MBC的結(jié)果評(píng)估綿馬酚的動(dòng)態(tài)殺菌效果,繪制其殺菌曲線,確定其發(fā)揮最佳藥效的濃度與時(shí)間;分別通過(guò)小鼠敗血癥致死模型和半致死模型進(jìn)行保護(hù)實(shí)驗(yàn)和治療實(shí)驗(yàn),綜合評(píng)價(jià)綿馬酚的體內(nèi)抗菌活性及效果。結(jié)果表明,綿馬酚在體內(nèi)外均具有顯著的抗MRSA活性,且達(dá)到了萬(wàn)古霉素抗菌效果。同時(shí),我們利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)綿馬酚作用前后MRSA菌株的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,并通過(guò)熒光定量RT-PCR方法對(duì)轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)進(jìn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)給畜牧業(yè)養(yǎng)殖帶來(lái)的危害
    1.2 國(guó)內(nèi)外治療動(dòng)物源MRSA的現(xiàn)狀
    1.3 香磷毛蕨素研究概況
        1.3.1 香鱗毛蕨簡(jiǎn)介
        1.3.2 香鱗毛蕨化學(xué)成分
        1.3.3 綿馬酚研究概況
第2章 綿馬酚抗MRSA體外活性研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 綿馬酚對(duì)金黃色葡萄球菌敏感菌株和MRSA的抗菌活性
        2.2.2 綿馬酚對(duì)ATCC33591的殺菌曲線
        2.2.3 綿馬酚殺胞內(nèi)菌實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 綿馬酚作用ATCC33591菌株前后的掃描電子顯微鏡觀察
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 MIC值和MBC值結(jié)果
        2.3.2 殺菌曲線
        2.3.3 綿馬酚殺胞內(nèi)菌活性
        2.3.4 綿馬酚作用ATCC33591前后掃描電鏡圖片
    2.4 小結(jié)與討論
第3章 綿馬酚抗MRSA體內(nèi)活性研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 小鼠敗血癥致死模型保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 小鼠半致死模型橫型治療實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 小鼠致死與亞致死模型MRSA侵染菌量的確定
        3.3.2 小鼠敗血癥模型保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.3 小鼠半致死模型治療數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.4 病理學(xué)檢查
    3.4 小結(jié)與討論
第4章 綿馬酚抗MRSA分子作用機(jī)制研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)菌種
        4.1.2 試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 樣品處理
        4.2.2 細(xì)菌RNA提取
        4.2.3 高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        4.2.4 熒光定量PCR
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量剪切及統(tǒng)計(jì)
        4.3.2 差異基因表達(dá)的聚類(lèi)分析
        4.3.3 轉(zhuǎn)錄組作用前后ATCC33591轉(zhuǎn)錄組表達(dá)差異分析
        4.3.4 差異表達(dá)基因的GO富集分析
        4.3.5 差異表達(dá)基因的KEGG富集分析
        4.3.6 KEGG代謝通路中相關(guān)基因作用分析
        4.3.7 熒光定量RT-PCR結(jié)果分析
    4.4 小結(jié)與討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
博士后期間其他工作內(nèi)容
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3847419