microRNAs(miRNAs)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種非編碼的小RNA，長(zhǎng)度僅18-24個(gè)核苷酸左右，普遍介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)，參與調(diào)控機(jī)體各種生理進(jìn)程。miRNA與疾病如腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)血液循環(huán)中也存在miRNA，循環(huán)miRNA可以作為腫瘤無創(chuàng)診斷的生物學(xué)標(biāo)志物。目前對(duì)未知miRNA序列的發(fā)現(xiàn)主要以生物信息學(xué)預(yù)測(cè)為主，而直接克隆法較少見。 運(yùn)用RNA反轉(zhuǎn)錄5’末端的轉(zhuǎn)換模板技術(shù)（Switching Mechanism At5’endof the RNA Transcript, SMART），對(duì)雞肝臟中的microRNA進(jìn)行了篩選分離，獲取了新的microRNA序列。實(shí)驗(yàn)中，首先給microRNA加上poly(A)尾巴，結(jié)合SMART技術(shù)反轉(zhuǎn)錄得到microRNA的cDNA文庫(kù)，再將長(zhǎng)度適宜的片段連接到質(zhì)粒，最后轉(zhuǎn)化大腸桿菌克隆測(cè)序，獲得了3條未知序列。經(jīng)查證，這3條序列在miRBase中沒有任何記錄，其前體的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)都能形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，符合microRNA前體的結(jié)構(gòu)特征，為新發(fā)現(xiàn)的microRNA。 接著，針對(duì)獲得的3條microRNA新序列，運(yùn)用了3個(gè)常用的靶基因預(yù)...

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 miRNA 簡(jiǎn)介
        1.1.1 miRNA 概述
        1.1.2 miRNA 的生物發(fā)生
        1.1.3 miRNA 的作用機(jī)制
        1.1.4 miRNA 的基因結(jié)構(gòu)特征
    1.2 miRNA 研究進(jìn)展
        1.2.1 miRNA 的表達(dá)及其調(diào)控
        1.2.2 miRNA 與胚胎干細(xì)胞的增殖分化
        1.2.3 循環(huán) miRNA 與腫瘤
        1.2.4 miRNA 與其它疾病及診斷
        1.2.5 miRNA 與生物進(jìn)化
    1.3 miRNA 研究方法
        1.3.1 生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè) miRNA 序列
        1.3.2 分子生物學(xué)方法
        1.3.3 miRNA 靶基因的預(yù)測(cè)及鑒定
    1.4 課題的目的與意義
第二章 家雞肝臟miRNA的克隆
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要的酶和試劑
        2.1.3 緩沖溶液和試劑的配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 引物合成
    2.2 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 RNA 的提取
        2.3.2 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) RNA 提取的完整性
        2.3.3 cDNA 的制備
        2.3.4 PCR 擴(kuò)增檢測(cè)模板的制備效率
        2.3.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)
        2.3.6 miRNA 的克隆測(cè)序
    2.4 測(cè)序結(jié)果分析
    2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.5.1 目的條帶的分離
        2.5.2 目的條帶的連接轉(zhuǎn)化
        2.5.3 交錯(cuò) PCR 鑒定陽(yáng)性克隆
        2.5.4 序列分析
    2.6 討論
第三章 miRNA 序列的靶基因預(yù)測(cè)
    3.1 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.1 miRNA 的靶基因預(yù)測(cè)
        3.1.2 靶基因的功能分析
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 miRNA 的靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果
        3.2.2 靶基因的功能分析結(jié)果
    3.3 討論
結(jié)語與展望
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3845420