大腸桿菌作為一種條件致病菌,其數(shù)量龐大,廣泛分布于自然界中,可引起人和動物泌尿系統(tǒng)感染、敗血癥等。臨床上,β-內(nèi)酰胺類藥物被作為治療細菌性感染疾病的重要選擇,其濫用致使產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended-Spectrumβ-Lactamases,ESBLs)大腸桿菌的出現(xiàn),其耐藥性強,且耐藥基因能夠由質(zhì)粒介導發(fā)生水平傳遞,因此,其危害值得關注。水環(huán)境作為耐藥基因獲得、傳遞及儲存的理想環(huán)境,同時,水也是其污染源頭、載體及抗菌藥物濫用的承擔者;人類開放性傷口一旦通過與水體接觸被水中產(chǎn)ESBLs菌株感染,將導致預防和治療上的極大困難,因此,其研究意義不容小覷。城市河流是貫穿城區(qū)、與人們生活息息相關的城市河流水環(huán)境以及水質(zhì)情況,對維護城市公共衛(wèi)生安全具有尤為重要的意義。本研究為調(diào)查城市河流-泰安市渿河(貫穿城區(qū))中產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的流行情況、耐藥性及其耐藥性傳遞規(guī)律。于2018年3-5月,從泰安地區(qū)城市河流-渿河,采集272份河水樣品,通過藥物篩選培養(yǎng)基培養(yǎng),PCR擴增,雙紙片表型確證試驗,分離鑒定產(chǎn)ESBLs大腸桿菌;通過平板凝集試驗對其進行特定血清型O157:H7檢測。選取當?shù)厝酸t(yī)...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 大腸桿菌基本概況
    1.2 抗生素
        1.2.1 抗生素的污染現(xiàn)狀
        1.2.2 β-內(nèi)酰胺類抗生素
    1.3 耐藥性
        1.3.1 耐藥性分類
        1.3.2 耐藥機制
        1.3.3 抗性基因的轉(zhuǎn)移特點
    1.4 ESBL定義與類別
        1.4.1 ESBL類別
            1.4.1.1 TEM型
            1.4.1.2 SHV型
            1.4.1.3 CTX-M型
            1.4.1.4 OXA型
            1.4.1.5 其它類型ESBLs
        1.4.2 ESBL表型檢測方法
            1.4.2.1 表型確證試驗
            1.4.2.2 雙紙片擴散法
            1.4.2.3 克拉維酸法瓊脂法
            1.4.2.4 E-test法
    1.5 大腸桿菌分子分型方法
        1.5.1 脈沖場凝膠電泳
        1.5.2 多位點序列分型
            1.5.2.1 ST131 型大腸桿菌
        1.5.3 腸桿菌基因間重復共有序列
        1.5.4 多位點可變重復序列分析
    1.6 臨床常用治療方法
    1.7 水環(huán)境中的耐藥基因
    1.8 耐藥性研究新視角
    1.9 本研究目的及意義
2 材料及方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗中所用菌株
        2.1.2 試驗所用試劑及試劑配制
        2.1.3 試驗所用主要儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 泰安市渿河中產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的流行情況
            2.2.1.1 樣品的來源及采集與處理
            2.2.1.2 大腸桿菌分離鑒定方法
            2.2.1.3 產(chǎn)ESBLs大腸桿菌確證試驗
            2.2.1.4 大腸桿菌O157:H7 血清型測定
        2.2.2 泰安市渿河中產(chǎn)ESBLs大腸桿菌耐藥性研究
            2.2.2.1 耐藥表型試驗
            2.2.2.2 耐藥基因的檢測方法
            2.2.2.3 I類整合子檢測
        2.2.3 產(chǎn)ESBLs大腸桿菌分型研究
            2.2.3.1 ERIC-PCR分型方法
            2.2.3.2 多位點序列分型方法
        2.2.4 產(chǎn)ESBLs大腸桿菌耐藥性傳遞的研究
            2.2.4.1 接合試驗
            2.2.4.2 接合子初步篩選標準
            2.2.4.3 疑似接合子鑒定試驗
            2.2.4.4 接合子結(jié)果分析
            2.2.4.5 接合子耐藥表型檢測方法
            2.2.4.6 接合子耐藥基因檢測方法
3 結(jié)果與分析
    3.1 泰安市渿河中產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的流行情況
        3.1.1 泰安渿河中大腸桿菌的分離鑒定結(jié)果
        3.1.2 產(chǎn)ESBLs表型確證結(jié)果
        3.1.3 大腸桿菌O157:H7 血清型測定結(jié)果
    3.2 泰安市渿河中產(chǎn)ESBLs大腸桿菌耐藥性研究結(jié)果
        3.2.1 耐藥表型結(jié)果
        3.2.2 耐藥基因測定結(jié)果
        3.2.3 部分耐藥基因與耐藥表型相關性分析
        3.2.4 I類整合子檢測結(jié)果
    3.3 產(chǎn)ESBLs大腸桿菌ERIC及 MLST分型結(jié)果
        3.3.1 MLST多位點序列分型結(jié)果
        3.3.2 構建最小生成樹分析結(jié)果
        3.3.3 ST型與國內(nèi)人源大腸桿菌ST型對比分析
        3.3.4 MLST、耐藥表型、耐藥基因、I類整合子列表綜合分析
        3.3.5 ERIC-PCR分型結(jié)果
    3.4 產(chǎn)ESBLs大腸桿菌耐藥性傳遞的研究結(jié)果
        3.4.1 接合試驗結(jié)果
        3.4.2 接合子耐藥表型測定
        3.4.3 接合子耐藥基因轉(zhuǎn)移結(jié)果
4 討論
    4.1 泰安城市河流—渿河河水中產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的流行情況
    4.2 河水中產(chǎn)ESBLs大腸桿菌耐藥性及耐藥基因分析
    4.3 ERIC分型與MLST分型
    4.4 體外耐藥性傳遞的研究
5 結(jié)論
6 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
研究生期間發(fā)表的文章



本文編號：3841576