為了建立一種快速、高效檢驗(yàn)豬肝樣品中豬戊型肝炎病毒(HEV)污染情況的新方法,即HEV實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄-重組酶聚合酶擴(kuò)增(RT-qRPA)檢測(cè)方法。參考TwistDx公司RPA技術(shù)說明,以基因4型豬HEV分離株的保守基因序列為模板設(shè)計(jì)合成特異性引物和EXO探針建立HEV RT-qRPA檢測(cè)方法。以HEV國(guó)際檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)RT-qPCR方法為參照,對(duì)新建立的RT-qRPA檢測(cè)方法的特異性、敏感性及可重復(fù)性進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證評(píng)價(jià),進(jìn)一步通過對(duì)錦州市豬肝樣品中HEV的污染情況進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)分析,評(píng)估RT-qRPA檢測(cè)方法的臨床可靠性。結(jié)果顯示,本研究所建立的RT-qRPA檢測(cè)方法在39℃恒溫條件下20 min即可檢出陽性值,且特異性強(qiáng)、敏感性高,HEV RNA的最低檢測(cè)限約17.7拷貝,與RT-qPCR標(biāo)準(zhǔn)參考方法相同。148份豬肝臟樣品中HEV的陽性檢出率為0.8%(1/148),與RT-qPCR方法的檢出結(jié)果一致。本研究成功建立了HEV RT-qRPA檢測(cè)方法,該方法敏感性高、特異性好、操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)快速,為下一步開發(fā)POCT便攜檢測(cè)設(shè)備應(yīng)用于我國(guó)畜牧獸醫(yī)基層工作的HEV檢測(cè)提供了技術(shù)參考。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
    1.2 毒株及樣品來源
    1.3 MS2-HEV質(zhì)控品及質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    1.4 引物和探針的設(shè)計(jì)
    1.5 病毒RNA的提取
    1.6 參考實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法
    1.7 實(shí)時(shí)熒光定量RT-RPA檢測(cè)方法的建立
    1.8 HEV RT-RPA方法特異性分析
    1.9 臨床樣本檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 RT-qRPA與RT-qPCR參考方法擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線
    2.2 RT-qRPA的特異性試驗(yàn)結(jié)果
    2.3 臨床樣品的RT-qRPA與RT-qPCR檢測(cè)一致性評(píng)價(jià)結(jié)果
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