間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)是近些年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn),它具有自我增殖、免疫調(diào)控和多向誘導(dǎo)分化潛能。MSCs的研究主要集中在骨髓、脂肪、骨骼、肌肉、肺、胰腺、羊水和臍帶血等組織中。真皮來(lái)源的干細(xì)胞的研究相對(duì)較少。目前為止,還未見(jiàn)關(guān)于綿羊胚胎真皮來(lái)源的MSCs生物學(xué)特性方面的研究報(bào)道。本試驗(yàn)以綿羊胚胎來(lái)源的真皮間充質(zhì)干／祖細(xì)胞(Dermis-derived Mesenchymal Stem/progenitor Cells, DMS/PCs)為研究對(duì)象,對(duì)其進(jìn)行分離、培養(yǎng)、生物學(xué)特性和多向誘導(dǎo)分化潛能及鑒定進(jìn)行了初步探索和研究,得出了以下結(jié)論： 1.本試驗(yàn)設(shè)計(jì)了三種培養(yǎng)體系,并根據(jù)干細(xì)胞的生長(zhǎng)和活性狀況篩選出了胎羊真皮MSCs的最佳分離方法和培養(yǎng)體系：以30日齡綿羊胚胎背部皮膚組織為材料,用0.25%DispaseⅡ4℃消化過(guò)夜,用機(jī)械法將表皮層與真皮層分離,再用0.25%的胰酶消化真皮層20min獲得DMS/PCs,體外最佳培養(yǎng)體系為：L-DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%FBS+2mM L-谷氨酰胺+1%非必需氨基酸+100IU/mL青霉素+100...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 DMS/PCs的來(lái)源和發(fā)現(xiàn)
    1.3 DMS/PCs的生物學(xué)特性
        1.3.1 DMS/PCs的形態(tài)學(xué)特征
        1.3.2 DMS/PCs的增殖特性
    1.4 DMS/PCs的表面標(biāo)記物
    1.5 DMS/PCs的分離培養(yǎng)
    1.6 DMS/PCs的體外誘導(dǎo)分化潛能
        1.6.1 DMS/PCs脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化
        1.6.2 DMS/PCs成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化
        1.6.3 DMS/PCs神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化
    1.7 應(yīng)用前景
第二章 綿羊真皮間充質(zhì)干/祖細(xì)胞分離、培養(yǎng)與鑒定
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)對(duì)象
        2.1.2 試驗(yàn)主要儀器和設(shè)備
        2.1.3 試驗(yàn)主要試劑和配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 綿羊DMS/PCs的分離培養(yǎng)
        2.2.2 綿羊DMS/PCs培養(yǎng)體系的優(yōu)化
        2.2.3 綿羊DMS/PCs的傳代培養(yǎng)
        2.2.4 綿羊DMS/PCs的凍存與復(fù)蘇
        2.2.5 綿羊DMS/PCs的表面標(biāo)記物檢測(cè)
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 綿羊DMS/PCs的分離培養(yǎng)
        2.3.2 綿羊DMS/PCs培養(yǎng)體系優(yōu)化
        2.3.3 綿羊DMS/PCs的傳代培養(yǎng)
        2.3.4 綿羊DMS/PCs的凍存與復(fù)蘇
        2.3.5 綿羊DMS/PCs表面標(biāo)記物檢測(cè)
    2.4 討論
        2.4.1 綿羊DMS/PCs的分離培養(yǎng)
        2.4.2 綿羊DMS/PCs的鑒定
    2.5 本章小結(jié)
第三章 綿羊真皮間充質(zhì)干/祖細(xì)胞的生物學(xué)特性研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 試驗(yàn)對(duì)象
        3.1.2 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備
        3.1.3 試驗(yàn)主要試劑及配制
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 綿羊DMS/PCs凍存前后活率
        3.2.2 綿羊DMS/PCs生長(zhǎng)曲線繪制
        3.2.3 綿羊DMS/PCs細(xì)胞周期檢測(cè)
        3.2.4 綿羊DMS/PCs核型分析
        3.2.5 綿羊DMS/PCs誘導(dǎo)分化及鑒定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 綿羊DMS/PCs凍存前后活率計(jì)算
        3.3.2 綿羊DMS/PCs生長(zhǎng)曲線繪制
        3.3.3 綿羊DMS/PCs的細(xì)胞周期檢測(cè)
        3.3.4 綿羊DMS/PCs的核型分析
        3.3.5 綿羊DMS/PCs的誘導(dǎo)分化及鑒定
    3.4 討論
        3.4.1 綿羊DMS/PC生長(zhǎng)和增殖特點(diǎn)
        3.4.2 綿羊DMS/PC核型分析
        3.4.3 綿羊DMS/PC誘導(dǎo)分化及鑒定
    3.5 本章小結(jié)
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3841269