黑色素皮質(zhì)激素受體1(melanocortin-1 receptor,MC1R)基因在哺乳動(dòng)物毛色調(diào)控過(guò)程中起重要作用,但外源MC1R基因?qū)ρ蝰?Lama pacos)毛囊干細(xì)胞(hair follicle stem cells,HFSCs)中小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(micropht-halmiaassocitated transcription factor,MITF)和酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因表達(dá)特性的影響研究較少。為了探討MC1R基因?qū)ITF和TYR mRNA表達(dá)的影響,本研究通過(guò)構(gòu)建羊駝MC1R真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-MC1R,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HFSCs,qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后MC1R、MITF、TYR mRNA表達(dá)量;并采用細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)對(duì)MC1R進(jìn)行細(xì)胞定位。qRT-PCR結(jié)果顯示,羊駝HFSCs轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-MC1R后,MC1R mRNA表達(dá)量顯著增加(P<0.05),分別是空載體組和對(duì)照組的2.15和2.26倍,MITF和TYR mRNA表達(dá)量增加不顯著(P>0.05);細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果顯示,MC1R在羊駝HFSC...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 MC1R基因的克隆
    1.3 pc DNA3.1(+)-MC1R重組克隆載體的構(gòu)建
    1.4 pc DNA3.1(+)-MC1R轉(zhuǎn)染羊駝HFSCs
    1.5 q RT-PCR檢測(cè)MC1R、MITF、TYR m RNA表達(dá)
    1.6 MC1R細(xì)胞免疫化學(xué)定位
    1.7 數(shù)據(jù)處理與圖像分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 羊駝MC1R全長(zhǎng)基因的獲取
    2.2 質(zhì)粒pc DNA3.1(+)-MC1R構(gòu)建及雙酶切鑒定
    2.3 q RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后相關(guān)基因表達(dá)
    2.4 MC1R蛋白的細(xì)胞表達(dá)定位
3 討論
    3.1 載體pc DNA3.1(+)-MC1R質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果
    3.2 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒對(duì)羊駝HFSCs黑色素相關(guān)基因的影響
    3.3 MC1R基因在羊駝HFSCs中的定位
4 結(jié)論



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