探討外源性加入一定濃度的血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)與細胞膜上的VEGFR-2受體結(jié)合后激活PI3K/Akt信號通路后與永生化黃體細胞的體外增殖存活及孕酮分泌之間的相關(guān)性,揭示VEGF/VEGFR-2/PI3K/Akt信號途徑在黃體細胞增殖存活和在孕酮分泌過程中起到的重要作用。本試驗采用永生化黃體細胞和臍靜脈內(nèi)皮細胞進行數(shù)量比例近似1:1的方式共培養(yǎng)以及單獨黃體細胞培養(yǎng),采用MTT法檢測細胞增殖存活情況,并運用ELISA試劑盒雙抗夾心法檢測不同細胞樣品中分泌孕酮的含量變化,同時用實時熒光定量PCR(q RT-PCR)分析孕酮合成過程中三種特異性標志酶:3β-HSD、P450scc和STAR1mRNA表達量的變化。本試驗所得結(jié)果如下:1、一定濃度的外源性VEGF(50ng/ml)對共培養(yǎng)細胞的增殖存活有明顯的促進作用,在24h和48h兩個時間點均對共培養(yǎng)細胞的增殖存活起到促進作用,表現(xiàn)為差異顯著(P<0.01)。2、不同濃度的外源性LY294002與一定濃度的外源性VEGF聯(lián)合給藥組可以顯著抑制共培養(yǎng)細胞的增殖存...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻綜述
    第一章 黃體研究進展
        1.1 黃體的形成
        1.2 黃體的退化
            1.2.1 黃體的功能性退化
            1.2.2 黃體的結(jié)構(gòu)性退化
        1.3 黃體的功能與調(diào)節(jié)
            1.3.1 黃體的分泌功能
            1.3.2 黃體的調(diào)控功能
        1.4 黃體分泌孕酮的分子調(diào)控機制
            1.4.1 孕酮分泌的慢調(diào)節(jié)
            1.4.2 孕酮分泌的快調(diào)節(jié)
        1.5 彌散性神經(jīng)內(nèi)分泌細胞標志物
        1.6 展望
    第二章 VEGF及其受體研究進展
        2.1 VEGF家族及其功能
        2.2 VEGF受體家族及其特性
        2.3 VEGF與黃體功能的關(guān)系
        2.4 VEGF與生殖調(diào)控的關(guān)系
            2.4.1 子宮的血管生成及調(diào)節(jié)
            2.4.2 胎兒的血管生成及調(diào)節(jié)
            2.4.3 生殖激素對血管生成因子的調(diào)控
        2.5 展望
    第三章 PI3K-Akt信號通路的研究進展
        3.1 PI3K-Akt信號通路的組成與結(jié)構(gòu)
        3.2 PI3K-Akt信號通路的活化與功能
            3.2.1 在細胞周期中的作用
            3.2.2 在細胞凋亡中的作用
            3.2.3 在維持血糖平衡中的作用
            3.2.4 相關(guān)癌癥研究
            3.2.5 PI3K-Akt與HPG軸以及生殖關(guān)系
        3.3 PI3K-Akt-e NOS信號通路研究進展
        3.4 PI3K-Akt通路抑制劑家族及其功能
        3.5 展望
試驗研究
    第四章 PI3K/Akt細胞信號傳導通路對永生化山羊黃體細胞存活的影響
        4.1 材料
            4.1.2 主要儀器與試劑
            4.1.3 主要試劑的配制
        4.2 方法
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 不同濃度PI3K抑制劑LY294002對單獨培養(yǎng)黃體細胞增殖的影響
            4.3.2 不同濃度PI3K抑制劑LY294002與VEGF聯(lián)合給藥對單獨培養(yǎng)黃體細胞增殖的影響
            4.3.3 不同濃度PI3K抑制劑LY294002與VEGF聯(lián)合給藥對共培養(yǎng)細胞增殖的影響
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 PI3K/Akt細胞信號傳導通路對永生化山羊黃體細胞分泌孕酮的影響
        5.1 材料
        5.2 方法
            5.2.1 細胞樣本及培養(yǎng)液的收集
            5.2.2 ELISA試驗
            5.2.3 提取Total RNA
            5.2.4 反轉(zhuǎn)錄
            5.2.5 引物設(shè)計
            5.2.6 RT-PCR
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 孕酮檢測干擾因素排除試驗
            5.3.2 不同濃度PI3K抑制劑LY294002對單獨培養(yǎng)黃體細胞孕酮分泌的影響
            5.3.3 不同濃度PI3K抑制劑LY294002與VEGF聯(lián)合給藥對單獨培養(yǎng)黃體細胞孕酮分泌的影響
            5.3.4 不同濃度PI3K抑制劑LY294002與VEGF聯(lián)合給藥對共培養(yǎng)細胞孕酮分泌的影響
            5.3.5 RT-PCR實驗結(jié)果
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3838061