豬瘟(Classical swine fever, CSF)是由黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)的豬瘟病毒(Classical swine fever Virus, CSFV)所引起的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病。曾對我國的畜牧養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重影響,因其發(fā)病迅速、病死率高且有垂直感染等特點,已被國際獸疫防治局(OIE)列為重大動物疫病一類動物傳染病。在我國已采取強(qiáng)制免疫措施,近些年來,由于全國范圍內(nèi)進(jìn)行CSFV強(qiáng)制免疫工作,豬瘟的陽性率一直維持在10%～15%,尚不能徹底消滅,更多以伴發(fā)或者以溫和型豬瘟的形式為表現(xiàn)。故此,有學(xué)者認(rèn)為傳統(tǒng)的豬瘟疫苗可能對我國當(dāng)前流行的豬瘟病毒免疫保護(hù)作用有限。 本研究主要通過現(xiàn)有流行毒株,參照傳統(tǒng)疫苗進(jìn)行分子序列比對,從分子層面對比現(xiàn)有流行毒株與傳統(tǒng)疫苗株之間的差異。為分析我國CSFV遺傳變異情況,本研究根據(jù)己發(fā)表的文獻(xiàn)設(shè)計合成E2主要抗原區(qū)基因的引物,采用RT-PCR方法,對2012-2013年我國12個省收集到的組織樣品進(jìn)行E2基因擴(kuò)增與序列測定,并利用MEGA和DNAstar進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析。試驗結(jié)果如下： 結(jié)...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 CSFV基因的結(jié)構(gòu)和功能
        1.1.1 5’端非編碼區(qū)(5’-NTR)
        1.1.2 CSFV編碼區(qū)(ORF)
        1.1.3 3’端非編碼區(qū)(3’-NTR)
    1.2 CSFV分子流行病學(xué)研究進(jìn)展
        1.2.1 CSFV基因亞群研究進(jìn)展
        1.2.2 CSFV抗原表位研究進(jìn)展
    1.3 CSFV全基因研究
        1.3.1 國際CSFV全基因研究
        1.3.2 我國CSFV全序列研究
    1.4 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 樣品來源
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試驗細(xì)胞
    2.2 試驗方法
        2.2.1 試劑配制
        2.2.2 引物合成
        2.2.3 病料處理
        2.2.4 病料檢測
        2.2.5 CSFV流行毒株的分離
        2.2.6 全基因克隆
        2.2.7 序列測定拼接及結(jié)果分析
        2.2.8 CSFV的E2蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測
3 結(jié)果與分析
    3.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.1 CSFV的檢測及RT-PCR擴(kuò)增情況
        3.1.2 全基因10段RTPCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.3 HeN2F16序列拼接結(jié)果
    3.2 CSFV E2 B/C區(qū)遺傳變異情況
        3.2.1 CSFV亞群分布
        3.2.2 CSFV核苷酸同源性
        3.2.3 CSFV氨基酸同源性
        3.2.4 B/C區(qū)氨基酸位點變異
        3.2.5 HeN2F16全基因克隆
    3.3 分析與討論
        3.3.1 我國CSFV流行毒株分群特點
        3.3.2 B/C區(qū)氨基酸位點變異分析
        3.3.3 CSFV基因序列及蛋白質(zhì)分析
4 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3835440