“鴨短喙-侏儒綜合征”(Beak atrophy and dwarfism syndrome,BADS)是一種以雛鴨發(fā)育不良、喙萎縮變形、舌外伸腫脹和骨質(zhì)疏松為主要特征的傳染病。自2014年11月以來(lái),該病在我國(guó)東南多省的商品肉鴨群中發(fā)生并流行,給我國(guó)鴨養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究旨在從流行病學(xué)與病原學(xué)角度出發(fā),分離相關(guān)病原進(jìn)行致病性分析,明確引發(fā)BADS的病因,并建立病原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法,探究致病病原的相關(guān)特性,為該病的防控提供理論依據(jù)及技術(shù)支持。本文主要從以下三個(gè)方面進(jìn)行論述:首先,為了探究BADS的致病原因,本研究對(duì)發(fā)生BADS病鴨的肝臟和脾臟進(jìn)行了PCR/RT-PCR檢測(cè),排除了其他的鴨常見(jiàn)疫病,將該病的病原命名為鴨細(xì)小病毒(Duck parvovirus,DPV)。將陽(yáng)性病料研磨液接種鴨胚,盲傳5代,收獲尿囊液,通過(guò)PCR檢測(cè)、測(cè)序鑒定、同源進(jìn)化分析、動(dòng)物回歸試驗(yàn),最終確定本研究成功分離到了一株DPV(命名為DPV SD)。此外,本研究還利用鴨胚成纖維細(xì)胞(Duck embryo fibroblasts,DEF)對(duì)病毒進(jìn)行了分離培養(yǎng),PCR和間接免疫熒光試驗(yàn)(Indire...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 abstract 1 引言
1.1 水禽細(xì)小病毒病原學(xué)研究進(jìn)展
    1.1.1 分類地位
    1.1.2 形態(tài)特征及理化特性
    1.1.3 宿主范圍及培養(yǎng)特性
    1.1.4 分子生物學(xué)特征
1.2 水禽細(xì)小病毒流行病學(xué)研究進(jìn)展
    1.2.1 主要臨床癥狀及病理變化
    1.2.2 診斷方法
    1.2.3 防制
1.3 研究目的及意義 2 材料與方法
2.1 材料
    2.1.1 病毒、臨床樣品和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.1.2 主要分子生物學(xué)試劑和常用生化試劑
    2.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)溶液
    2.1.4 工程菌培養(yǎng)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)化用溶液
    2.1.5 主要儀器
2.2 方法
    2.2.1 病原的PCR檢測(cè)及純凈性檢測(cè)
    2.2.2 SD株鴨胚毒的分離與鑒定
    2.2.3 動(dòng)物回歸試驗(yàn)
    2.2.4 SD株細(xì)胞毒的分離與鑒定
    2.2.5 SD株全基因組各片段重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2.6 SD株全基因組序列的拼接及分析
    2.2.7 熒光定量PCR引物及探針的設(shè)計(jì)
    2.2.8 PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
    2.2.9 熒光定量PCR檢測(cè)方法的驗(yàn)證 3 結(jié)果與分析
3.1 DPVSD株的分離與鑒定
    3.1.1 發(fā)病鴨的流行病學(xué)及臨床特征
    3.1.2 病原PCR檢測(cè)及純凈性檢測(cè)結(jié)果
    3.1.3 鴨胚分離毒PCR鑒定結(jié)果
    3.1.4 EID50測(cè)定結(jié)果
    3.1.5 動(dòng)物回歸試驗(yàn)結(jié)果
    3.1.6 細(xì)胞分離毒PCR鑒定結(jié)果
    3.1.7 細(xì)胞分離毒IFA檢測(cè)結(jié)果
3.2 DPVSD株全基因組序列的測(cè)定與分析
    3.2.1 各片段PCR電泳結(jié)果
    3.2.2 全基因組序列特征分析
    3.2.3 NS基因序列特征分析
    3.2.4 VP基因序列特征分析
    3.2.5 ITR區(qū)序列特征分析
    3.2.6 潛在糖基化位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析
3.3 DPVTaq-Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立
    3.3.1 Taq-Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物的驗(yàn)證
    3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    3.3.3 反應(yīng)體系的優(yōu)化結(jié)果
    3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
    3.3.5 特異性試驗(yàn)結(jié)果
    3.3.6 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    3.3.7 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
    3.3.8 臨床樣品檢測(cè)結(jié)果 4 討論
4.1 DPVSD株的分離與鑒定
4.2 DPVSD株基因組全序的測(cè)定與分析
4.3 DPVTaq-Man實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立 5 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 作者簡(jiǎn)介 致謝 中文詳細(xì)摘要



本文編號(hào)：3835375