發(fā)布時(shí)間：2023-06-18 04:22

　　禽呼腸孤病毒(Avian reovius,ARV)屬于正呼腸孤病毒科(Reoviridae),正呼腸孤病毒屬(Orthoreovirus)。ARV感染雞引起的主要病癥有雞的病毒性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎及矮小綜合征等,除導(dǎo)致死亡和生產(chǎn)性能下降之外,該病還可誘發(fā)免疫抑制,導(dǎo)致機(jī)體對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答和多種病原體的抵抗能力顯著降低。由此可見,ARV感染對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的危害極大,給養(yǎng)禽業(yè)者造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。ARV是一種不含囊膜的雙鏈RNA病毒,其基因組由10個(gè)RNA基因片段組成,可以編碼病毒的八種結(jié)構(gòu)蛋白(λA、λB、λC、μA、μB、σA、σB和σC)及四種非結(jié)構(gòu)蛋白(μN(yùn)S、σNS、p10和p17)。其中,σA蛋白是由S2基因編碼,介于外衣殼μBC蛋白和內(nèi)衣殼λA蛋白之間的結(jié)構(gòu)蛋白,它能夠促進(jìn)ARV內(nèi)、外層衣殼結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。σA蛋白可以通過與dsRNA序列相結(jié)合的方式來抑制蛋白酶的活化過程,從而抑制細(xì)胞內(nèi)干擾素的分泌,協(xié)助病毒粒子躲避宿主細(xì)胞內(nèi)的免疫防御;在病毒侵染的過程中,σA蛋白可以通過其水解酶的活性作用作為病毒轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的能量來源;σA蛋白還可以對(duì)宿主細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)節(jié),促進(jìn)病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 禽呼腸孤病毒簡(jiǎn)介
        1.1.1 禽呼腸孤病毒的基本特征
        1.1.2 禽呼腸孤病毒病毒的結(jié)構(gòu)特征
        1.1.3 禽呼腸孤病毒的復(fù)制
        1.1.4 禽呼腸孤病毒的研究進(jìn)展
        1.1.5 禽呼腸孤病毒主要蛋白的簡(jiǎn)介
    1.2 熱休克蛋白及其與病毒相互作用的研究進(jìn)展
        1.2.1 熱休克蛋白HSP70及其與病毒相互作用的研究進(jìn)展
        1.2.2 熱休克蛋白HSP40及其與病毒相互作用的研究進(jìn)展
    1.3 核糖體蛋白L4(RPL4)及其與病毒相互作用的研究進(jìn)展
    1.4 免疫共沉淀技術(shù)在蛋白質(zhì)研究中的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的意義
第二章 禽呼腸孤病毒σA基因和禽源HSP70、HSP40、RPL4基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.1 材料
        2.1.1 主要試驗(yàn)試劑
        2.1.2 主要試驗(yàn)儀器
        2.1.3 主要試驗(yàn)試劑的配置
        2.1.4 引物
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 pMD-18T-HSP70、pMD-18T-HSP40(DNAJB6)、pMD-18T-RPL4重組載體的構(gòu)建
        2.2.2 pMD-18T-σA重組載體的構(gòu)建
        2.2.3 pEF1α-HA-σA、pEF1α-Myc-HSP70、pEF1-Myc-HSP40(DNAJB6)、pEF1α-Myc-RPL4真核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 目的基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.2 目的基因連接pMD-18T的陽(yáng)性克隆篩選結(jié)果
        2.3.3 真核表達(dá)重組質(zhì)粒的陽(yáng)性克隆篩選結(jié)果
        2.3.4 真核表達(dá)重組質(zhì)粒的雙酶切驗(yàn)證結(jié)果
    2.4 分析與討論
第三章 禽呼腸孤病毒σA基因和禽源HSP70、HSP40、RPL4蛋白的表達(dá)和驗(yàn)證
    3.1 材料
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試驗(yàn)試劑
        3.1.3 主要試驗(yàn)儀器
        3.1.4 主要試驗(yàn)試劑的配置
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 IFA驗(yàn)證目的蛋白的表達(dá)
        3.2.2 Western blot驗(yàn)證目的蛋白的表達(dá)
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 間接免疫熒光檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)結(jié)果
        3.3.2 Western blot檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)結(jié)果
    3.4 分析與討論
第四章 禽呼腸孤病毒σA基因和禽源HSP70、HSP40、RPL4蛋白相互作用的驗(yàn)證
    4.1 材料
        4.1.1 主要試驗(yàn)試劑
        4.1.2 主要試驗(yàn)儀器
        4.1.3 主要試驗(yàn)試劑的配置
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 免疫共沉淀(Co-IP)
        4.2.2 Western blot檢測(cè)蛋白的相互作用
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果
    4.4 分析與討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3834771