胚胎干細(xì)胞為基因功能、生物發(fā)育學(xué)以及生理學(xué)等研究提供了一個(gè)有力的工具。人類胚胎干細(xì)胞的出現(xiàn)也為再生醫(yī)學(xué)治療提供了一個(gè)很好的材料和模型，因?yàn)榕咛ジ杉?xì)胞能夠向機(jī)體內(nèi)的幾乎所有組織和器官發(fā)育與分化。但是，目前大部分哺乳動(dòng)物如山羊尚沒(méi)有建系的胚胎干細(xì)胞，其嚴(yán)重制約了轉(zhuǎn)基因山羊等技術(shù)的快速發(fā)展。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞在小鼠、大鼠和人等動(dòng)物上的成功，促進(jìn)了多能性干細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等研究。但目前，山羊體細(xì)胞的重編程效率很低，其體細(xì)胞的重編程機(jī)制仍然不夠清楚，并且可能存在不同于小鼠和人體細(xì)胞重編程的特點(diǎn)。 在細(xì)胞水平上，蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶有許多生理功能，它們能夠影響細(xì)胞分化和發(fā)育，生長(zhǎng)與增殖。有預(yù)測(cè)顯示，哺乳動(dòng)物基因組中有占1％的基因編碼甲基轉(zhuǎn)移酶，這表明這類酶在體內(nèi)發(fā)揮重要作用。精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶能夠?qū)ΨQ和不對(duì)稱甲基化組蛋白和非組蛋白。它們中的大部分成員能夠調(diào)節(jié)染色體結(jié)構(gòu)，并控制一類基因的轉(zhuǎn)錄和沉默。與其它蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶不同，PRMT5能夠協(xié)同作用于許多蛋白基團(tuán)，來(lái)調(diào)節(jié)體內(nèi)、體外的表觀遺傳改變。已有很多進(jìn)展顯示PRMT5能夠調(diào)控細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞生存。作為一個(gè)調(diào)節(jié)酶，PRMT5從表觀層遺傳上發(fā)揮著調(diào)節(jié)...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 多能性干細(xì)胞及 PRMT5 研究進(jìn)展
        1.1 多能性干細(xì)胞研究進(jìn)展
            1.1.1 胚胎干細(xì)胞
            1.1.2 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞研究現(xiàn)狀
            1.1.3 奶山羊干細(xì)胞相關(guān)研究
        1.2 PRMT5 的研究進(jìn)展
            1.2.1 精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶
            1.2.2 PRMT5 的功能及作用機(jī)理
            1.2.3 PRMT5 影響多能性的研究進(jìn)展
        1.3 小結(jié)與展望
試驗(yàn)研究
    第二章 奶山羊 PRMT5 慢病毒載體構(gòu)建及基因分析
        2.1 材料和方法
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要溶液的配制
            2.1.5 PRMT5 在奶山羊不同組織的表達(dá)及定位檢測(cè)
            2.1.6 pCDH-CMV-PRMT5-EF1-GreenPuro 載體構(gòu)建
            2.1.7 病毒包裝及病毒感染后檢測(cè)
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 QRT-PCR 檢測(cè) PRMT5 在奶山羊不同組織的表達(dá)
            2.2.2 PRMT5 在奶山羊睪丸和卵巢組織的表達(dá)定位
            2.2.3 載體構(gòu)建及生物信息學(xué)分析
            2.2.4 GEF 細(xì)胞超表達(dá) PRMT5 后免疫熒光及半定量檢測(cè) PRMT5 表達(dá)情況
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 奶山羊胚胎成纖維細(xì)胞重編程
        3.1 材料和方法
            3.1.1 主要儀器
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要溶液配制
            3.1.4 GEF 的分離及慢病毒包裝
            3.1.5 不同轉(zhuǎn)染試劑及方法對(duì)奶山羊胚胎成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果比較
            3.1.6 奶山羊胚胎成纖維細(xì)胞重編程
            3.1.7 多能性細(xì)胞鑒定
            3.1.8 類胚體生成及向三胚層分化檢測(cè)
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 GEF 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            3.2.2 不同轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染奶山羊胚胎成纖維細(xì)胞效果比較
            3.2.3 重編程過(guò)程不同階段細(xì)胞形態(tài)結(jié)果
            3.2.4 重編程細(xì)胞多能性檢測(cè)結(jié)果
            3.2.5 重編程細(xì)胞向三胚層分化的免疫熒光檢測(cè)結(jié)果
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 PRMT5 通過(guò)影響 P53 信號(hào)通路影響重編程
        4.1 材料和方法
            4.1.1 GEF 細(xì)胞超表達(dá) PRMT5
            4.1.2 RT-PCR 檢測(cè)
            4.1.3 細(xì)胞周期檢測(cè)
            4.1.4 Western Blot 檢測(cè)
            4.1.5 超表達(dá) PRMT5 對(duì) GEF 重編程時(shí)細(xì)胞 AP 陽(yáng)性率的檢測(cè)
            4.1.6 超表達(dá) PRMT5 細(xì)胞對(duì)克隆形成的影響
            4.1.7 P53 抑制劑對(duì)細(xì)胞增殖和 PRMT5 表達(dá)量的影響
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 細(xì)胞形態(tài)觀察
            4.2.2 細(xì)胞周期結(jié)果
            4.2.3 PCR 和 QRT-PCR 結(jié)果
            4.2.4 Western Blot 結(jié)果
            4.2.5 超表達(dá) PRMT5 對(duì)誘導(dǎo)山羊胚胎成纖維細(xì)胞的影響
            4.2.6 P53 抑制劑能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖，并且能夠降低 PRMT5 的表達(dá)
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
結(jié)論
本文研究的創(chuàng)新點(diǎn)及進(jìn)一步研究的課題
    創(chuàng)新點(diǎn)
    進(jìn)一步研究課題
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介及研究生期間工作進(jìn)展



本文編號(hào)：3834016