為建立快速、靈敏且特異的檢測(cè)豬圓環(huán)病毒3型(porcine circovirus, PCV)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,本研究根據(jù)ORF2基因的保守序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物和TaqMan探針,通過(guò)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒來(lái)制作熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,優(yōu)化反應(yīng)條件,驗(yàn)證敏感性、特異性及重復(fù)性,建立了檢測(cè)PCV3的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示,該方法可以特異性檢測(cè)出PCV3,而對(duì)豬圓環(huán)病毒2型、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬細(xì)小病毒、偽狂犬病毒等檢測(cè)結(jié)果均為陰性,表明其具有良好的特異性。用構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒測(cè)得的靈敏度可以達(dá)到10 copies/μL,重復(fù)試驗(yàn)批內(nèi)及批間變異系數(shù)均小于2%,表明其具有良好的靈敏性和重復(fù)性。以上結(jié)果表明,本研究建立的TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法具有快速、靈敏性高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),可為我國(guó)PCV3型的早期檢測(cè)及相關(guān)研究工作提供可靠的技術(shù)支持。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病料及陽(yáng)性質(zhì)粒來(lái)源
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
    1.4 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品DNA模板的制備
    1.5 TaqMan熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
    1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及敏感性試驗(yàn)
    1.7 特異性試驗(yàn)
    1.8 重復(fù)性試驗(yàn)
    1.9 臨床樣本的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒構(gòu)建
    2.2 TaqMan熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
    2.3 熒光定量 PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
    2.4 特異性試驗(yàn)
    2.5 靈敏性試驗(yàn)
    2.6 重復(fù)性試驗(yàn)
    2.7 臨床樣本的檢測(cè)
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