為建立快速、靈敏且特異的檢測豬圓環(huán)病毒3型(porcine circovirus, PCV)的實時熒光定量PCR方法,本研究根據(jù)ORF2基因的保守序列設(shè)計一對特異性引物和TaqMan探針,通過構(gòu)建標準品質(zhì)粒來制作熒光定量PCR標準曲線,優(yōu)化反應(yīng)條件,驗證敏感性、特異性及重復性,建立了檢測PCV3的實時熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示,該方法可以特異性檢測出PCV3,而對豬圓環(huán)病毒2型、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬細小病毒、偽狂犬病毒等檢測結(jié)果均為陰性,表明其具有良好的特異性。用構(gòu)建的標準品質(zhì)粒測得的靈敏度可以達到10 copies/μL,重復試驗批內(nèi)及批間變異系數(shù)均小于2%,表明其具有良好的靈敏性和重復性。以上結(jié)果表明,本研究建立的TaqMan熒光定量PCR檢測方法具有快速、靈敏性高、特異性強的優(yōu)點,可為我國PCV3型的早期檢測及相關(guān)研究工作提供可靠的技術(shù)支持。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病料及陽性質(zhì)粒來源
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 引物的設(shè)計與合成
    1.4 質(zhì)粒標準品DNA模板的制備
    1.5 TaqMan熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
    1.6 標準曲線的建立及敏感性試驗
    1.7 特異性試驗
    1.8 重復性試驗
    1.9 臨床樣本的檢測
2 結(jié)果
    2.1 標準品質(zhì)粒構(gòu)建
    2.2 TaqMan熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
    2.3 熒光定量 PCR 標準曲線的繪制
    2.4 特異性試驗
    2.5 靈敏性試驗
    2.6 重復性試驗
    2.7 臨床樣本的檢測
3 討論



本文編號：3833501